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[目的]本实验通过构建血吸虫核酸疫苗加IFN-γ联合免疫小鼠,探讨联合疫苗pcDNA3.1(-)/SjDLC+pcDNA3.1(+)SjCB2及IFN-γ在日本血吸虫感染中的免疫保护性作用。[方法]利用PCR法,获取SjDLC,mIFN-γ基因,并构建pcDNA3.1(-)/SjDLC,pcDNA 3.1(+)/m IFN-γ重组质粒,双酶切及测序鉴定。将两种质粒分别转染至Hela细胞,Western blot鉴定其表达。BALB/c小鼠分为7组,分别为:PBS(A组)、pcDNA3.1(+)(B组)、pcDNA3.1(+)/mIFN-γ(C组)、pcDNA3.1(+)/SjCB2(D组)、pcDNA3.1(-)/SjDLC(E组)、pcDNA3.1(+)/SjCB2+pcDNA 3.1(-)/SjDLC(F组)、pcDNA3.1(+)/SjCB2+pcDNA3.1(-)/SjDLC+pcDNA3.1(+)/mIFN-γ(G组)。按照分组用核酸疫苗免疫小鼠,每两周免疫一次,共三次。末次免疫2周后,PCR法和免疫组化法检测小鼠肌肉中SjDLC,SjCB2,IFN-γ基因及表达。同时,对各组小鼠用血吸虫尾蚴进行攻击感染,分别在感染第0w、2w、4w、6w、8w及10w麻醉处死小鼠,收集血液、脾脏和肝脏组织进行实验。HE和Masson染色观察小鼠肝脏病理变化;流式细胞术检测小鼠肝脏、脾脏Th1和Th2细胞比例;ELISA检测IFN-γ、IL-4、IgG、IgE水平。取感染第6w小鼠计算减虫率、减卵率。[结果]Western blot显示SjDLC,IFN-γ能在HeLa细胞中表达。核酸疫苗第三次免疫BALB/c小鼠2周后,能从小鼠肌肉组织中扩增出SjCB2、SjDLC和mIFN-γ基因及观察到三个基因的表达。HE和Masson染色显示:血吸虫感染第6w后,虫卵肉芽肿及纤维化等病变以pbs组(a组)和pcdna3.1(+)组(b组)最为严重,且随着感染时间的延长病变加重。c、d、e、f、g组病变程度明显轻于a、b组,g组病变程度最轻。流式细胞术结果显示:血吸虫感染2w~4w,肝、脾组织中th1细胞比例均显著性高于未感染组(0w),p<0.05,于感染第4w达峰值,c、d、e、f、g组显著性高于a、b组,p<0.05,以g组th1比例最高,血吸虫感染第6w~10w,各组的th1细胞比例均显著性下降,但c、d、e、f、g组仍显著性高于a、b组,p<0.05,以g组th1水平最高;血吸感染第6w~10w,各组的th2细胞比例均显著性升高,第8w达峰值;但c、d、e、f、g组th2均显著性低于a、b组,p<0.05,以g组最低。细胞因子检测结果显示:各组ifn-γ水平与其th1细胞比例变化相一致;il-4水平与th2比例变化趋势一致。免疫后各核酸疫苗组igg显著性高于a、b、c组,p<0.05,其中以g组抗体水平最高;尾蚴攻击感染各组小鼠后,igg抗体在感染第6周达峰值,与0w组比较,p<0.05,各核酸疫苗组的抗体水平显著性高于a、b、c组,p<0.05,其中以g组抗体水平最高。ige水平在核酸疫苗免疫小鼠后无显著性变化,但在尾蚴攻击感染后第6周显著性升高,第8周达峰值,各核酸疫苗组的ige水平显著高于a、b、c组,p<0.05,以g、f组最高。减虫率和减卵率计算结果显示:各核酸疫苗组显著性高于a、b、c组,p<0.05,其中以g组最高,分别为40.5%、55.7%。[结论]核酸疫苗免疫balb/c小鼠后能产生一定抗血吸虫感染作用,以联合疫苗加ifn-γ免疫效果最佳。