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神经胶质瘤起源于神经上皮组织,年发病率在(7～10)/10万左右,是颅内肿瘤最常见的恶性肿瘤,占40%～50%。该类肿瘤患者大多预后不良,胶质母细胞瘤病人的平均生存期只有1年,仅少数病人可长期生存。临床上治疗胶质瘤大多采用综合治疗方案,包括手术、放疗、化疗等,但总体效果欠佳,近十年来胶质瘤患者的生存率未见明显提高,星形细胞瘤5年生存率约为30%左右。肿瘤光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)是20世纪80年代初兴起并逐渐发展起来的一种新的治疗方法,通过一定给药途径,让特定化学物质在靶组织中选择性浓集,这些特定的化学物质在一定波长的光作用下产生光动力效应而达到损伤或破坏靶组织的目的。光动力疗法这种特性非常适合肿瘤的辅助治疗。国外文献报道已经把PDT成功运用于皮肤肿瘤、消化道肿瘤的治疗中,PDT是继手术治疗、化学治疗、放射治疗之后,肿瘤治疗领域兴起的一种新的辅助治疗方法。本课题目的:探索新一代光敏剂5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)介导的PDT治疗脑胶质瘤的可能,并探讨其治疗的可能机制,从而为临床运用PDT综合治疗脑胶质瘤提供帮助。方法:通过体外实验方法,收集对数期生长的U251细胞,并以5-ALA介导PDT,再以CCK-8法计算U251细胞的存活率,以Hoechst 33258凋亡染色法及Annexin-V-PI染色法流式细胞术观察U251细胞死亡的可能机制。结果:1.以常规细胞培养方法复苏、培养U251人脑胶质瘤细胞,生长良好。2.通过荧光显微镜观测到:5-ALA与U251神经胶质瘤细胞共同培养,可以产生光敏剂原卟啉(PpIX)。且原卟啉(PpIX)大部分位于细胞的胞浆、胞膜,少部分位于核膜上,胞核内未见PpIX产生。3.5-ALA本身对U251细胞并无细胞毒性作用。4.无给予5-ALA孵育而单纯予激发光源照射U251细胞,其生存率无明显差别。5.在相同的条件下,5-ALA孵育时间不同,其介导PDT之后细胞存活率也显著不同,孵育时间4-6小时,能让细胞存活率最低。6.在一定的5-ALA低浓度范围内,5-ALA介导的PDT杀伤作用与其浓度成正比,但在2.5mmol/l时出现了饱和现象。7.相同条件下,激光能量越大,5-ALA介导的PDT效果越明显,但在累计能量达45J/cm2时也存在饱和现象。8.Hoechst 33258凋亡染色法发现PDT组有细胞凋亡现象,而非PDT组细胞基本无凋亡细胞。9.使用Annexin V-FITC-碘化丙啶双染色法的流式细胞术定量分析示:光动力学治疗组凋亡率、凋亡+坏死率较阴性对照组显著提高,同时,存在大量坏死细胞。总之,本实验证实,5-ALA介导的PDT能够有效的杀伤人神经胶质瘤细胞U251,在引起肿瘤细胞大量炎症性死亡的同时,也存在细胞凋亡的现象。相信,随着对PDT诱导细胞凋亡机制的深入研究,必将会极大地推动光动力疗法的改进和提高,使其更好地造福于社会。