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电致化学发光(Electrochemiluminescence,简称ECL)分析是将电化学手段和化学发光方法相结合的一种新技术。这种分析方法不仅灵敏度高,而且可以通过电位的控制来控制发光过程。因而引起了人们极大的兴趣。 电致化学发光分析是在化学反应进行的同时测量有关的动态发光,其电化学参数及其他影响因素很多,提高方法的选择性与可靠性是该方法广泛被应用的前提条件。该方法与流动注射分析法联用可以提高实验的自动化程度及实验的重现性,但所需试剂量大,不利于分子生物学、药学等领域的应用。因此本文主要立足于静态电致化学发光体系的性质研究。 虽然国内外很多研究者近年来在ECL方面做了大量工作,已报道的ECL物质包括鲁米诺,光泽精,吖啶酯,联吡啶钌等,但很多电致化学发光体系的机理还不是很清楚,应用也受局限。为了对某些ECL体系的机理做进一步的研究,并拓展其应用范围,本文将微分脉冲电位扫描(DPV)方式作用于常见的两种发光试剂,即三联钌吡啶和光泽精上,发现了它们ECL的新特征,同时做了相应的应用研究。作为常用的伏安分析法,DPV兼有线形扫描和阶跃脉冲两种效果,由于克服了充电电流的干扰,能提高电活性物质在电极上被检出的灵敏度,而将其应用于ECL法未见报道。此外,由于目前用于免疫分析和核酸杂交分析的ECL探针种类少且价格昂贵,本课题对标识生物大分子的电化学发光探针进行了一定的探索。 本论文共分为五章。论文的第一章,主要介绍了ECL的发展概况、特点、分类、基本原理及其在分析科学中的应用,同时还对课题的研究目的和意义做了概括。 论文的第二章研究了三联钌吡啶/曲通X-100体系在DPV扫描方式作用下的电致化学发光行为。在中性的B.R.缓冲液中,我们首次观察到分别对应于0.7V,0.95V和1.5V的三个ECL峰。通过一系列的电化学方法、电化学发光光谱法等方法对三个ECL峰的反应机理分别给出了解释。研究中我们还发现过氧化氢对该体系的电致化学发光强度有抑制作用,说明该体系可望用于过氧化氢的检测。 论文的第三章首次对光泽精阳极化扫描的电致化学发光行为及机理进行研究,并基于肾上腺素对其电致化学发光的增敏作用,建立了一种简单,快捷的测定肾上腺素的电化学发光方法。将该体系应用于肾上腺素注射液样品的检测,结果良好。 论文的第四章基于几种蕙酮类物质:大黄酸、大黄素、大黄素甲醚对传统的光泽精电致化学发光的增敏作用,建立了一种简单,快捷的测定三种蕙醒类物质的电化学发光方法。并结合各种电化学技术,电化学发光光谱法等方法对这一电致化学发光体系的反应机理做了详细的研究。 论文的第五章探讨了四磺酸酞普钻(CoS4Pc)对于鲁米诺一HZO:电致化学发光体系的催化作用,并将其用于蛋白质的测定。首先研究了中性体系下鲁米诺的电致化学发光行为。其次研究了CoS4Pc以及CoS4Pc与牛血清白蛋白复合产物对该体系电致化学发光的催化行为。利用COS4Pc与蛋白质复合产物对鲁米诺的电致化学发光的增强作用,建立起ECL检测蛋白质的新方法。同时结合紫外一可见吸收光谱、荧光光谱、共振光散射等方法对CoS护。和蛋白质分子的复合及反应机理进行了详细讨论。该部分的研究不仅为生物大分子电致化学发光探针的研究奠定了基础,也为毛细管电泳分离电化学发光检测生物大分子的研究奠定了一定基础。