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多汁乳菇(Lactarius volemus Fr.)属于伞菌目、红菇科、乳菇属,是一种根生食用菌,主要分布于在我国的云南、贵州、西藏等地区。多汁乳菇中含有丰富的矿物元素以及优质蛋白质,具有良好的生物活性。本课题主要针对多汁乳菇多糖的提取、分离纯化、结构解析以及生物活性等方面的开展研究。本文主要研究结果如下:研究超声波辅助提取多汁乳菇粗多糖工艺,利用单因素和响应面实验筛选获得多汁乳菇粗多糖最佳提取工艺:浸提时间150 min、液料比25:1、浸提温度85℃。在此条件下,多汁乳菇多糖的实际得率为4.15%。多汁乳菇糖液经大孔树脂脱色、Sevage法脱蛋白、醇沉、浓缩、烘干等步骤,得到黄色的多汁乳菇粗多糖LVF。粗多糖LVF经DEAE-52柱层析分离得到两种单一多糖LVF-Ⅰ、LVF-Ⅱ和一种非单一多糖LVF-Ⅲ,质量分别占上样量的32.10%、18.33%、6.22%;重均分子量Mw分别为12894 Da、14404 Da、9259 Da。对多汁乳菇多糖理化性质分析,结果表明三种多糖均不含可溶性淀粉和核酸,LVF-Ⅰ为白色棉絮状物质,蛋白质含量为0.97%,总糖含量是70.03%,糖醛酸含量是8.29%;LVF-Ⅱ为淡黄色棉絮状,蛋白质含量为4.66%,总糖含量为75.77%,糖醛酸含量是13.36%;LVF-Ⅲ为黄色棉絮状物质,蛋白质含量为6.31%,总糖含量为63.25%,糖醛酸含量为8.70%。对LVF-Ⅰ及LVF-Ⅱ进行结构分析,LVF-Ⅰ、LVF-Ⅱ均有主要有由葡萄糖醛酸、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,LVF-Ⅰ 5种单糖的摩尔比是:1.0:2.8:6.9:15.4:10.0;LVF-Ⅱ各单糖的摩尔比是1.0:1.1:4.4:24.4:4.7。红外光谱显示LVF-Ⅰ及LVF-Ⅱ均为多糖类物质,均含有α-D-甘露糖。经高碘酸氧化、Smith降解、甲基化以及核磁结果分析可知,LVF-Ⅰ可能是由1,6-D-Glu、1,6-D-Gal构成主链,支链为1,6-D-Man、1,3-D-Glu和1,4-D-Glu等;LVF-Ⅱ可能是由1,6-D-Glu构成主链,支链为1,4-D-Glu、1,6-D-Man、1,6-D-Gal、1,2,6-D-Gal等。多糖LVF-Ⅰ、LVF-Ⅱ均不存在三螺旋结构。采用ABTS+自由基的清除实验及FRAP法测定多汁乳菇多糖的抗氧化活性。结果表明,多汁乳菇多糖样品在0.25-10 mg/mL浓度范围内均具有一定的抗氧化活性,且与浓度呈正相关。其中粗多糖LVF各方面抗氧化活性均最高,LVF-ⅡI次之。多汁乳菇纯化多糖对人肺癌细胞H1299、人乳腺癌细胞MCF-7均有较强的抑制作用,且与浓度呈正相关性。对以上两种癌细胞抑制实验表明,LVF-Ⅱ抗肿瘤活性效果最佳,LVF-ⅡI及LVF-Ⅰ多糖次之,粗多糖LVF的抗肿瘤活性最弱。多汁乳菇多糖具有良好的免疫活性。在125-1000μg/mL浓度范围内,多汁乳菇多糖促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力与多糖浓度呈正相关,且在设定浓度范围内作用显著。在31.25-1000μg/mL浓度范围内,多汁乳菇多糖均可促进巨噬细胞分泌NO、IL-6及TNF-α细胞因子,并且具有剂量依赖性。RT-PCR法检测多糖对巨噬细胞的iNOS、IL-6及TNF-α基因表达的影响,在250-1000μg/mL浓度范围内,LVF-Ⅰ、LVF-Ⅱ、LVF-ⅡI可使iNOS、IL-6及TNF-α的基因表达上调。总体来说,多汁乳菇纯化多糖具有较强的免疫调节活性,并且单一多糖LVF-Ⅱ、LVF-ⅡI的活性较强,LVF-Ⅰ的活性次之,粗多糖LVF较弱。模拟胃肠液消化多汁乳菇多糖LVF-Ⅰ的分子量Mw降低,反应液中还原糖含量升高,说明模拟肠液破坏了多汁乳菇多糖LVF-Ⅰ的少量糖苷键。