副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种重要的食源性致病菌,能够引肠胃炎,败血症和伤口感染等三种典型临床症状。该菌自从1950年被发现以来,已经在全世界各国家地区被广泛报道,尤其是1996年印度加尔各答地区大规模爆发副溶血弧菌导致的食物中毒事件,极大提高了人们对该菌的重视程度。在我国,由副溶血弧菌引起的食物中毒事件呈明显上升趋势,已经成为导致居微生物性食物中毒的首要原因之一。因此对于该菌的检测和防治尤为重要。从2013年至2014年,本课题组采集来自湖北省各地小龙虾（克氏原螯虾）样品,分离鉴定了98株副溶血弧菌。我们使用多位点序列分型技术研究98株副溶血弧菌系统发生关系,结果发现在这些副溶血弧菌中,一共鉴定了54种序列型（ST）,其中有40种是首次报道,根据e BURST软件分析将这些分离株被分为6个组和42个单体,表明分离菌株基因的多样性。随机挑选40株分离菌株进行耐药性实验,结果显示所有菌株都对大部分抗生素敏感,但是几乎所有菌株全部耐受氨苄西林,并且表现出对头孢唑林、头孢呋辛和头孢呋辛脂中度敏感,其中VP9能够耐受多种抗生素。通过PCR检测分离株的毒力相关基因表明40.8%的菌株至少携带有一种毒力相关基因。最后通过小鼠模型检测某些分离株的毒性,结果表明其中有些分离株能对小鼠致死。我们的实验表明小龙虾中副溶血弧菌具有高度的基因多样性,并且其中有部分菌株可能引起人类疾病。在本研究中我们以自杀质粒p RE112为基础,通过构建Cpx基因敲除的重组质粒p RE112-△Cpx,利用接合转移的方法成功得到Cpx基因缺失株。这一方法首先将Cpx基因上下游同源臂通过酶切连接插入p RE112获得重组质粒p RE112-△Cpx,然后将重组质粒p RE112-△Cpx转化入供体菌E.coli X7213中,再利用接合转移将重组质粒p RE112-△Cpx插入受体菌ATCC33846基因组中获得单交换,再利用p RE112质粒上的Sac B的作为负向筛选标记筛选发生二次交换的菌株,最后通过PCR筛选和鉴定Cpx基因缺失株。该方法的建立将有助于我们在今后更好的从分子水平解释副溶血弧菌致病的机理。