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目的：脊髓损伤是一种常见病、多发病,可以造成损伤平面以下不可逆的感觉、运动及括约肌功能障碍,临床治疗效果不理想,一直是医学领域的热点和难点。本实验应用对脊髓损伤具有保护作用的红花黄素腹腔注射联合MSCs移植治疗大鼠脊髓损伤模型,探讨红花黄素腹腔注射和MSCs移植对损伤脊髓修复作用的机制,为提高脊髓损伤临床治疗效果寻找一条可行的途径。方法：贴壁分离法分离纯化大鼠MSCs,观察原代及传代MSCs的形态特点、生长特性,探讨其作为种子细胞的可行性并用流式细胞分析技术鉴定MSCs表面蛋白表达。携带GFP基因的腺病毒感染MSCs,荧光显微镜观察MSCs转染情况并计算转染效率,观察GFP-MSCs形态特点、生长特性,研究GFP标记对MSCs生物学性状的影响。55只成年S-D大鼠,雌雄各半,根据处理方法的不同,随机分为5组：A组(红花黄素腹腔注射+MSCs移植组)、B组(生理盐水腹腔注射+MSCs移植组)、C组(红花黄素腹腔注射+PBS组)和D组(生理盐水腹腔注射+PBS组),以上每组各10只；E组为补充组,15只。改良Allen法T7平面制作脊髓损伤模型。造模成功后,A组和B组损伤局部即时直接移植标记后的MSCs (GFP-MSCs) 6×106/60μl,C组和D组注射同等体积PBS。A组和C组术后按40mg/kg的剂量腹腔注射红花黄素,B组和D组注射同等剂量的生理盐水,每日1次,共用2w。实验过程中,各组的死亡动物后从E组中随机选取补充,重新开始计算模型动物的喂养处理时间,以保证各组实验动物数目的相同。术后1w、2w、3w和4w时采用BBB评分法进行后肢功能评分后心脏灌注取材,制作冰冻切片,荧光显微镜观察移植的MSCs; HE染色观察组织形态学变化；免疫组化检测GFAP、NeuN和NGF的表达。结果：1、贴壁分离法分离纯化的贴壁细胞形态、生长特性与MSCs一致,流式细胞分析技术检测细胞表面蛋白的表达：CD45阳性率14.47%,CD44阳性率89.26%,CD29阳性率93.27%提示获得的细胞是MSCs;2、携带GFP基因的腺病毒感染MSCs后,荧光显微镜观察证实MSCs的GFP标记成功,腺病毒的转染效率为(93%±2%),转染后MSCs的形态学、生长特性无明显变化；3、荧光显微镜下,GFP-MSCs移植后各个时间点1w、2w、3w和4w时的冰冻组织切片均可观察到GFP-MSCs发出的明亮的绿色荧光,证明移植的MSCs可以在大鼠损伤的脊髓中存活；4、术后2w-4W,红花黄素腹腔注射或MSCs移植的单独应用均可提高大鼠BBB评分的得分,二者联用作用更加明显,差异有显著性(P<0.05),术后1w时,各组间评分的差异性不显著(P>0.05)；5、术后1w、2w、3w和4w各个时间点冰冻组织切片HE染色显示红花黄素腹腔注射或MSCs移植的单独应用均可改善神经组织病变情况,减少空腔的形成,其改善程度和BBB评分得分情况一致,二者联用病变作用更加明显；6、免疫组化检测显示各组GFAP、NeuN和NGF表达均随着术后时间的延长而增加,相同时间点同一指标A组、B组和C组的表达水平明显高于D组,差异有显著性(P<0.05),其中A组的表达水平又高于B组和C组,差异有显著性(P<0.05),B组的表达水平高于C组,差异有显著性(P<0.05)。结论：1、贴壁分离法是一种较好的MSCs分离方法,所获贴壁细胞生长迅速,活力良好,流式细胞分析技术证实为MSCs,可用作组织工程的种子细胞；2、应用携带GFP基因的腺病毒感染MSCs,GFP转染效率高,对MSCs的生物学特性没有明显影响,标记后的MSCs能够在大鼠的脊髓中成活、显示,GFP是一种较好的MSCs标记方法；3、红花黄素腹腔注射或MSCs移植单独应用能够提高NGF的分泌,促使干细胞向神经细胞和神经胶质细胞方向分化,有利于受损神经组织的修复,二者联用具有协同作用。