脂肪组织在动物机体能量储存、代谢调节中发挥重要的作用,脂肪的种类和数量影响牛肉的品质。研究表明一些micro RNAs（miRNAs）对脂肪细胞增殖分化具有重要的调控作用。miRNAs是一类内源性非编码RNAs,长度约为22 nt左右,主要通过调控靶基因的转录或转录后水平,进而参与特定生物学过程。转录组测序发现秦川牛公牛肌内脂肪中bta-miR-33a的表达量是阉牛的2.2倍。通过在线软件Target Scan和KEGG富集分析,我们发现bta-miR-33a/b可能靶向抑制SIRT6、CDK6、TWIST1和HMGA2基因,并且bta-miR-33a/b预测靶基因富集在多条与脂肪形成相关的信号通路。因此,本研究以秦川牛前体脂肪细胞为研究材料,旨在探究超表达或干扰bta-miR-33a/b对秦川牛前体脂肪细胞增殖分化的影响。通过在线数据库miRbase和双荧光素酶检测系统筛选并验证bta-miR-33a/b与调控脂肪增殖分化相关靶基因的靶向关系。主要研究结果如下:1.秦川牛脂肪中bta-miR-33a/b的鉴定在秦川牛的不同组织中检测bta-miR-33a/b的表达量,发现bta-miR-33a/b是在脂肪组织中显著高表达。另外,bta-miR-33a/b在秦川牛前体脂肪细胞分化时期差异表达。重要的是,KEGG富集分析显示bta-miR-33a/b的预测靶基因富集在多条脂肪形成的相关信号通路上,如MAPK信号通路。2.bta-miR-33a抑制秦川牛前体脂肪细胞增殖在秦川牛前体脂肪细胞中,超表达bta-miR-33a能够显著下调脂肪细胞增殖标志基因CCNB1、PCNA m RNA的表达;Ed U染色结果显示,超表达bta-miR-33a显著减少Ed U阳性细胞数目。另外流式细胞仪检测结果表明:超表达bta-miR-33a显著下调脂肪细胞S期的细胞比率;而干扰bta-miR-33a则可以上调脂肪细胞S期的细胞比率。利用双荧光素酶检测系统确定bta-miR-33a与SIRT6、CDK6的靶向关系。在秦川牛脂肪细胞中,超表达bta-miR-33a可以抑制SIRT6和CDK6的蛋白水平的表达,而干扰bta-miR-33a则促进SIRT6和CDK6的蛋白水平的表达。3.bta-miR-33b抑制秦川牛前体脂肪细胞分化在秦川牛前体脂肪细胞中,超表达bta-miR-33b能够显著下调脂肪细胞分化标志基因CEB/Pα和FABP4 m RNA水平,并显著降低细胞中脂滴和甘油三酯含量。相反,干扰bta-miR-33b促进脂肪细胞分化。通过双荧光素酶检测系统进一步明确bta-miR-33b与TWIST1和HMGA2的靶向关系。在秦川牛前体脂肪细胞中,超表达bta-miR-33b可以抑制TWIST1和HMGA2蛋白水平的表达;而干扰bta-miR-33b则可以促进TWIST1、HMGA2蛋白水平的表达。本研究明确了bta-miR-33a/b对秦川牛前体脂肪细胞增殖分化的作用,机制研究发现bta-miR-33a可能通过抑制靶基因SIRT6和CDK6转录后翻译水平,从而抑制脂肪细胞增殖;bta-miR-33b可能通过抑制靶基因TWIST1和HMGA2转录后翻译水平,从而抑制脂肪细胞分化。这些结果将为秦川牛的改良和育种提供分子依据。