东亚钳蝎蝎毒多肽的分离纯化,结构鉴定,活性测定以及基因表达研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:colinwangaaaa
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全蝎是我国传统中药的宝贵资源,其有效成分主要为蝎毒毒素,中医认为它有熄风镇痉,攻毒散结,通络止痛的功效。主要用于治疗癫痫,惊厥,中风,痹痛,破伤风,癌症等疾病。另外,蝎毒毒素已经被证明是多种离子通道的配体,是阐明多种离子通道的结构和功能的有力工具。为了寻找新型的离子通道配体以及高效低毒的活性多肽,我们对蝎毒毒素的化学成分进行了研究,初步测定主要成分对钠和钾电流的影响,测定了长链蝎毒毒素的镇痛活性和对哺乳动物的毒性,并用2D-NMR技术对一个新的短链蝎毒毒素的二级结构进行了分析,最后用原核表达系统表达了一个镇痛活性多肽,经纯化并鉴定后,测定了重组多肽的镇痛活性。 综合运用多种色谱技术,从东亚钳蝎蝎毒中共分离得到14个蝎毒毒素,通过质谱,酶切,Edman降解等方法共确定了11个蝎毒毒素的一级结构,其中有4个为新的蝎毒毒素,分别命名为BmK Ang M1,BmK ML,Martentoxin和MartentoxinⅠ。另有三个短链蝎毒毒素仅测定了分子量和氨基酸组成,发现和以前报道的蝎毒多肽的分子量有明显不同,将其分别命名为BmK S1,BmK S2,BmK S3。 BmK Ang M1和BmK ML为从东亚钳蝎蝎毒中分离得到的2个新的长链蝎毒毒素,BmK AngM1含有64个氨基酸,分子量为7040.5 Da,等电点为5.8,其氨基酸序列和α哺乳动物毒素有很高的同源性,BmK Ang M1和α哺乳动物毒素结构上最大的区别位于17-21位氨基酸。BmK ML含有65个氨基酸,分子量为7216.3Da,等电点为9.0,其序列跟α哺乳动物毒素有较高的同源性。 Martentoxin和MartentoxinⅠ为从东亚钳蝎中分离并鉴定的2个新的短链蝎毒毒素,分别含有37和36个氨基酸,分子量分别为4058.0 Da和3910.7 Da,两者之间只相差一个Phe,它们的氨基酸序列和CTX类毒素中的Lqh15-1具有较高的同源性。 电生理活性测定发现4个新的蝎毒毒素和3个已知蝎毒毒素对钠、钾通道有明显的作用,其中BmK Angm1对钠通道表现出β哺乳动物毒素对电压依赖型钠通道的作用方式,抑制钠通道的激活,BmK AngM1对电压依赖型瞬间外向钾电流也有
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