HCMV/HIV-1共感染患者HCMV gN基因型分析

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目的了解安徽地区HCMV/HIV-1共感染患者中HCMV糖蛋白N(glycoprotein N,g N)的基因型分布;分析HIV-1感染者中HCMV g N基因序列,并进一步了解安徽地区HCMV流行株g N基因变异情况和进化状态;明确HCMV/HIV-1共感染者和pp65抗原血症阳性的非免疫缺陷患者间HCMV g N基因型分布的差异;探讨HCMV/HIV-1共感染对患者疾病进程的影响,以及不同g N基因型感染与AIDS发病和相关死亡的关系。方法2013年12月至2014年7月期间在合肥市和阜阳市疾病预防控制中心(Center for disease control and prevention,CDC)通过随机抽样的方法获得HIV-1感染者全血样本359份,同期从合肥市内医院收集HCMV pp65抗原血症阳性的非免疫缺陷患者全血样本12份。首先,采用pp65抗原血症实验对359例HIV-1感染者进行HCMV活动性感染检测,筛选阳性样本;其次,利用HCMV g N(UL73)基因巢式PCR扩增HCMV活动性感染患者全血DNA,限制性核酸内切酶MboⅠ、ScaⅠ和SalⅠ对巢式PCR产物进行限制性片段长度多态性分析(restricted fragment length polymorphism analysis,RFLP),对于多基因型HCMV混合感染样本则采用PCR克隆测序的方法进行g N基因型分析;最后,通过队列随访研究探讨不同型别HCMV感染与AIDS患者发病和死亡的关系。结果HCMV pp65抗原血症检测发现,359例HIV-1感染者中pp65抗原血症阳性患者28例,HIV活动性感染率为7.8%,对其中20例HCMV活动性感染患者的全血DNA样本进行PCR-RFLP分析,结果表明,HIV-1感染患者中HCMV g N基因型分布如下:g N-3a,4/20(20%);g N-1,4/20(20%);g N-4b,1/20(5%);g N-4d,1/20(5%);混合感染,10/20(50%)。多基因型别混合感染的HIV-1患者中,以两种基因型的HCMV混合感染居首,约占混合感染人数的80%。克隆测序研究发现,安徽地区的HIV-1感染者中至少流行两种g N-4b型HCMV病毒株,其中一种g N-4b基因序列在106714位存在一个新的突变位点,导致其酶切图谱发生改变,将此g N基因型命名为g N-4b(2)基因型。在随访期间,HCMV pp65抗原血症阳性的HIV-1感染者更易转变为AIDS患者(RR﹦9.78),且g N-1和g N-4型感染者发病和相关死亡风险是其它基因型的4.6倍(p<0.05)。结论安徽地区HCMV/HIV-1共感染患者中HCMV g N基因型分布呈多样性,其中g N-3a和g N-1为安徽地区HIV-1感染者中流行的主要基因型别;不同的人群中HCMV g N基因型分布有明显差异,HIV-1感染者中HCMV多基因型混合感染率要高于非免疫缺陷患者;HCMV二次或多次感染在HIV/AIDS患者中普遍存在;HCMV活动性感染可能会加速HIV-1感染者疾病进程,其中以g N-1和g N-4型HCMV活动性感染相对危险度最高。
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