论文部分内容阅读
目的:翼状螺旋转录因子P3(Foxp3) 高表达于CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)并在介导抑制功能方面发挥着重要作用。最近，Foxp3 不断被证实表达于多种类型的肿瘤细胞，但是胃癌还未见报道。通过本研究拟探讨：胃癌中是否存在Foxp3转录物和成熟蛋白的表达；在共培养体系中，效应T细胞增殖的阻滞是否与Foxp3的表达有关。从而进一步揭示肿瘤细胞参与免疫逃逸的机制及发掘Foxp3 潜在的临床应用价值。
方法:根据Treg细胞表达Foxp3的特点，以此为阳性对照，建立PCR、流式细胞术、Western blot和免疫组化等Foxp3的检测方法并进一步分析其在胃癌的表达水平和分布特点。利用CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25-CD127+作为表面标志，分选Treg细胞和效应T细胞，评价胃癌细胞对效应T细胞增殖的抑制能力。通过使用transwell 装置分隔共培养的胃癌细胞/Treg细胞和T细胞，进一步探讨增殖阻滞是否依赖细胞间接触的方式。
结果:
①胃癌中Foxp3基因的表达：通过PCR、流式细胞术、Western blot等检测方法，检测到Foxp3mRNA和蛋白在各类型细胞的表达水平呈现一定的模式：PBMC(Treg)>BGC>SGC>MGC>GES-1(正常对照)，其中胃癌细胞Foxp3 表达水平明显高于正常对照GES-1，但低于PBMC(Treg)的Foxp3 表达水平。Foxp3 免疫组化也证实了胃癌微环境中浸润调节性T细胞和Foxp3+胃癌细胞的存在，正常胃组织未见阳性染色。
②胃癌细胞抑制效应T细胞的增殖：在运用流式细胞术成功分选Treg细胞和效应T细胞的基础上，体外共培养实验表明，当Treg细胞和效应T细胞的比例为1:1时，Treg细胞能明显抑制效应T细胞增殖；而且，Foxp3+胃癌细胞也具有免疫抑制活性，虽然相比Treg细胞其活性较弱，但明显高于正常对照GES-1。此外，相比transwell组将两类共培养细胞分隔开，直接接触组Foxp3+细胞对效应T细胞的增殖抑制作用更为明显。
结论:在胃癌中，不仅调节性T细胞表达特异性转录因子Foxp3，而且胃癌细胞本身也表达Foxp3。体外实验说明，胃癌细胞/调节性T细胞能抑制CD4+CD25-效应T细胞增殖，这种抑制功能与Foxp3的表达水平有关，以细胞间的直接接触机制为主。