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为确保我国乳业持续保持快速、健康、良性发展,乳品掺假一直以来是乳品安全质量着力解决的问题,特别是非法添加更是防控重点。三聚氰胺、水解动物蛋白(HAP)等都是非法添加物,三聚氰胺国家已有严格防控措施及检测手段,而水解动物蛋白在乳制品中的检测分析方法目前尚未形成标准,有待于建立一套快速、简便、有效的检测方法。羊乳作为陕西省的特色资源,受到广泛重视与保护,羊奶粉是婴幼儿配方奶粉的主要基料,更应加强检测手段完善与质量安全的体系建设。本研究以羊奶粉为原料,以L-羟脯氨酸(L-HYP)为水解动物蛋白(HAP)的检测特征物,确立了一种微波辅助水解比色法快速测定羊奶粉中添加水解动物蛋白的检测方法。参照有关检测方法,采用单因素和正交试验优化了比色条件和微波辅助水解前处理条件,最终确定一种可行的适合于羊奶粉中HAP的快速检测技术。主要结论如下:(1) L-HYP作为水解动物蛋白的特征氨基酸具有可行性,其含量约10%左右,而乳蛋白中普遍缺乏此种氨基酸。因此可以通过此特征氨基酸将乳蛋白和其他动物蛋白进行区分鉴定,因此L-HYP可以定性定量表征样品中的水解动物蛋白。(2)不同来源的水解动物蛋白中L-HYP的含量差异比较。受试的2种不同来源的HAP其蛋白质含量及其水解的L-HYP含量存在差异,水解皮骨混合蛋白(S1)比水解骨蛋白(S2)含量大,所含L-HYP测定值分别为S1=10.02%和S2=7.83%。(3)检测比色条件优化。对其影响因素(氧化温度、氧化时间、显色剂加入量、显色时间等)进行紫外分光光度比色法检测羊奶粉中水解动物蛋白的最佳比色条件的比较,结果显示:水解液pH7.0,氧化温度20℃,氧化时间20min,显色温度为60℃,显色时间为20min,回收率与重现性较好。(4)微波辅助水解条件优化。通过选取的因素(硫酸浓度、体积、微波时间、功率)运用正交试验(L9(34))得到水解优化条件是:硫酸浓度4mol/L,添加体积6mL,微波功率720w,时间40~45min时,与传统水解方法对比,两种方法相对误差范围为-4.5~1.6%,测定精度相同,时间大幅度缩短,即由传统加热水解16h降至40~45min。(5)该技术可以快速定性定量判定羊奶粉中HAP的添加,可替代传统HAP检测方法,本方法检测结果具有较高准确度和重现性,L-HYP浓度与吸光度具有良好的线性关系,决定系数R2为0.9968,加标回收率在92.24%~100.56%之间,相对标准偏差RSD为2.16%。水解动物蛋白和掺假样品的精密度RSD分别为1.6%和-1.3%,该方法检测精度较高。多次验证有效,本检测方法快速、经济、高效,对相关行业和企业具有参考价值。