食线虫真菌的保存及部分菌种分子学鉴定研究

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食线虫真菌是动植物寄生线虫重要的生防菌株。本选题的目的是对不同种属的食线虫真菌的保存方法进行研究探讨,在多个菌种短期和长期保存中,寻求一种或者多种较好的保存方法,可以保持或提高菌株的存活能力,并且同时可以保持良好的捕食效果,此后,对在之前从中国采样分离的12株菌株的ITS序列进行扩增、测序后,对这些分离株的序列进行系统进化分析,研究其同其他相似菌株的亲缘关系,对这12株分离株进行鉴定。其研究内容如下:采用2%麸皮浸出液琼脂斜面保存、土壤干燥保存、硅胶粒脱脂牛奶保存、改良的硅胶粒吸附保存、冰冻保存(-18℃和-80℃)6种保存方式保存分离株,6个月后检查其存活和捕食效果。结果显示,各种方式保存6个月的分离株存活率分别为100%,94.12%,96.43%,95.56%,88.89%,70.37%,捕食率分别为87.31%,77.08%,81.48%,97.67%,75.00%,63.16%。其中试管斜面保存的存活效果最好,硅胶粒脱脂牛奶保存次之。改良的硅胶粒吸附保存的捕食效果最佳,试管斜面保存次之。采用试管斜面法、冷冻保存法(-18℃和-80℃)、真空冷冻干燥、改良硅胶粒吸附法、土壤干燥法、三角锥瓶中谷物保存的方法研究菌株保存3-5年后的存活和捕食能力,并对冷冻保存(-18℃和-80℃)、真空冷冻干燥保存和试管斜面保存这四种方式保存3年后的菌株,利用体外双平皿培养法测定对其对绵羊粪便中捻转血矛线虫L3的捕食效果。结果表明,菌株使用真空冷冻干燥法保存最佳。在冷冻保存(-18℃和-80℃)、真空冷冻干燥保存和试管斜面保存时对捻转血矛线虫L3的减少率分别为88.81%-97.61%,75.20%-97.56%,93.99%-99.64%,87.36%-97.59%。通过对粪便及相关基质中分离的12株分离株DNA提取、PCR扩增测序,获得其18S rDNA、28S rDNA部分序列及ITS1、5.8S rDNA、ITS2全部序列,经GenBank多序列比对,系统发育进化分析,并结合部分形态学结果进行分析,结果表明,这12株菌均为节丛孢属菌株。NPS027、PS015、NPS044、F046、BS087、BS012、NPH037、447这8株菌株为少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora),NPS014菌株为奇妙节丛孢菌(Arthrobothys thaumasia)。NPS033、NPS058、NF015这3株菌株为弯孢节丛孢菌(Arthrobothys musiformis)。
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