论文部分内容阅读
本文主要从以下三个部分展开论述： 第一部分 SHP-1在鼻咽癌细胞株中的mRNA和蛋白表达水平测定 目的：检测蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1在鼻咽癌细胞株中表达情况。 方法：通过PCR、Western检测不同分化程度的鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2及5-8F中SHP-1的mRNA和蛋白表达水平。 结果：5-8F和CNE-1中SHP-1的mRNA和蛋白表达水平较高，CNE-2中SHP-1的mRNA和蛋白表达水平较低，其中5-8F与CNE2、CNE-1与CNE-2的mRNA和蛋白水平差别具有统计学意义（P＜0.05），5-8F与CNE-1中的mRNA和蛋白水平差别不具有统计学意义（P＞0.05）。 结论：SHP-1在5-8F和CNE-1中mRNA和蛋白表达水平较高，在CNE-2的mRNA和蛋白水平表达较低。 第二部分 SHP-1下调对鼻咽癌细胞生物学行为的影响 目的：SHP-1SiRNA转染高表达SHP-1的5-8F细胞，探讨SHP-1下调对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。 方法：SHP-1SiRNA经脂质体LipofectamineTM2000转染高表达SHP-1的5-8F细胞，通过PCR、Western-blot检测转染前后细胞SHP-1的mRNA及蛋白水平的表达情况，MTT检测转染前后细胞增殖情况，流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡及周期情况，Transwell侵袭小室模型测定细胞体外侵袭能力。 结果：SHP-1SiRNA转染高表达SHP-1的5-8F细胞,PCR、Western-blot检测转染后的5-8F细胞相比SiNeg组和Control组SHP-1的mRNA和蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）；MTT检测转染后5-8F细胞增殖加快（P＜0.05）；流式细胞仪检测转染后的5-8F细胞相比SiNeg和Control组细胞凋亡无明显变化，三组间凋亡率差别无统计学意义；流式细胞仪检测转染后的5-8F细胞G1期明显减少（P＜0.05），S期变化不明显（P＞0.05），G2/M期明显增加（P＜0.05）；Transwell侵袭小室检测转染后的5-8F细胞侵袭能力明显增强（P＜0.05），而SiNeg组细胞与Control细胞侵袭能力无明显差别（P＞0.05）。 结论：SHP-1表达降低促进鼻咽癌细胞生长，细胞周期阻滞在G2/M期，侵袭能力增强。 第三部分SHP-1上调对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及机制探讨 目的：SHP-1过表达慢病毒载体感染低表达SHP-1的CNE-2细胞，探讨SHP-1上调对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及其机制。 方法：SHP-1过表达慢病毒载体感染低表达的CNE-2细胞，通过PCR、Western-blot检测感染前后细胞SHP-1的mRNA及蛋白水平的表达情况，MTT检测感染前后细胞增殖情况，流式细胞仪检测感染前后细胞凋亡及周期情况，Transwell侵袭小室模型测定细胞体外侵袭能力，Western检测 SHP-1下游基因磷酸化的stat3的表达情况。 结果：SHP-1过表达慢病毒载体感染低表达SHP-1的CNE-2细胞，PCR、Western-blot检测感染后的细胞SHP-1表达明显升高（P＜0.05），MTT检测感染后CNE-2细胞细胞增殖受到抑制（P＜0.05）；流式细胞仪检测三组细胞凋亡率无明显变化，差别不具有统计学意义；流式细胞仪检测感染后细胞G1期明显减少（P＜0.05），S期明显增多（P＜0.05），G2/M期变化不明显（P＞0.05），细胞周期阻滞在S期；Transwell侵袭小室检测感染后CNE-2细胞的侵袭能力减弱（P＜0.05），而NC组细胞与Control细胞侵袭能力无明显差别（P＞0.05）。为探讨SHP-1影响鼻咽癌细胞生物学行为的机制，选取高表达SHP-1的感染后的CNE-2细胞，其p-stat3表达水平相比NC组细胞与Control细胞明显下降（P＜0.05），这可能与SHP-1使p-stat3去磷酸化有关，进而抑制stat3通路引起细胞一系列上述生物学变化。 结论：SHP-1表达增加抑制鼻咽癌细胞生长，细胞周期阻滞在S期，侵袭能力减弱，SHP-1在鼻咽癌细胞中可能通过抑制stat3起着抑癌基因的作用。