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目的:测定东亚钳蝎毒素ITX(Immunetoxin,ITX)的氨基酸含量;建立蝎毒素ITX逐级分离纯化的方法;利用蛋白质组学方法,建立分辨率高和重复性好的东亚钳蝎毒素ITX(以下简称蝎毒素ITX)蛋白质的双向凝胶电泳图谱,筛选并鉴定某些组分的结构。 方法:将常压柱分离得到的蝎毒素蛋白ITX,进行氨基酸含量分析;高效液相分离蝎毒素ITX;阴极电泳对蝎毒素ITX进行一维分离;制备蝎毒素ITX蛋白样本,以17cmpH3-10固相pH梯度胶条(immobilizedpHgradiednt,IPG)做第一向等电聚焦(IEF);18％SDS聚丙烯酰胺凝胶为第二向进行双向电泳(2-DE);PDQuest7.1分析软件分析电泳图谱,筛选目的蛋白,对其中两个重现性和稳定性好的蛋白点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,得到肽质量指纹图谱(PMF)数据,登陆网站http://www.matrixscience.com,用Mascot程序检索NCBInr数据库,鉴定蛋白质。 结果:蝎毒素ITX17种氨基酸的含量从0.14%～11.35%不等;经高效液相分离得到5个峰;经阴极电泳分离得7条带;从蝎毒素ITX蛋白样品中共筛选出9个等电点不同,分子量约为5800D的蛋白点,其中蛋白点1、2、3、4位于酸性区,相对丰度较低,蛋白点5、6、7、8、9位于碱性区,相对丰度较高。获得了蝎毒多肽的PMF数据,蛋白点未得到鉴定,需要更换检索条件或进行蛋白质测序才能进行进一步认定。 结论:测定了蝎毒素ITX蛋白的17种氨基酸含量,其中半胱氨酸含量较高,易于形成二硫键,加大了解聚难度;高效液相得5个峰;阴极电泳获得到了7条带;获得了重复性较好的双向电泳凝胶图谱,2-DE分离得9个蛋白点,获得了蛋白点的PMF数据,建立蝎毒素ITX蛋白质组学研究方法,为后续工作奠定了基础。