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[目的]通过对滇重楼茎叶提取物化学成分研究,明确其所含主要化学成分;通过对提取物及其主要成分初步药理活性筛选、薄层鉴别及含量测定等方面进行研究,初步建立总提取物的质量控制方法,为滇重楼茎叶部分下一步的深度开发、合理利用提供科学依据。[方法]提取物样品制备:取重楼茎叶部分粗粉,70%乙醇回流提取3次,提取液经HPD-100大孔吸附树脂柱层析,依次用不同浓度乙醇洗脱划段,收集30%乙醇洗脱物段浓缩、干燥,即得滇重楼茎叶提取物。化学成分研究:利用硅胶柱层析、反向C18柱层析及其半制备型液相色谱等现代分离手段对滇重楼茎叶提取物的化学成分进行分离纯化;利用C谱、H谱和质谱等仪器进行已分化合物波谱学分析和结构鉴定。药理活性研究:通过大鼠进行体外给药,考察滇重楼茎叶提取物及其主要成分对抗血小板聚集的影响。质量研究:参照《中国药典》2020版一部、四部有关质量研究指导原则、技术要求和研究方法对滇重楼茎叶提取物进行薄层色谱鉴别、HPLC图谱主要成分指认及其含量测定等方面的质量研究。[结果]1、提取物样品的制备:基于课题组前期确定的提取工艺,投料重楼茎叶126公斤,共制备得到滇重楼茎叶提取物2.18kg。2、化学成分研究:取上述段样品,通过硅胶柱层析、反向C18柱层析及其半制备型液相色谱等分离手段,从滇重楼茎叶30%乙醇部分中分离得到24个化合物,并对其进行了 C谱、H谱和质谱等波谱解析,确定了 17个化合物的结构,分别为:kaempferol 7-O-β-D-glucopyranoside(1)、isorhamnetin-3-O-β-gentiobiosi de(2)、7-O-α-L-rhamnopyranoside-kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside(3)、isorha mnethin 3-O-glucoside(4)、kaempferol(5)、Isorhamnetin(6)、Quercetin 3-O-β-gl ucopyranoside(7)、kaempferol-3-O-β-robinobinoside(8)、kaempferol-3-O-α-L-rhamn opyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(9)、isorhamnetin-3-O-rutinoside(10)、kaem pferol 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranoside 7-O-α-L-rhamnopyran oside(11)、3-O-(α-L-arabmopyranosyl-(1→6)-β-D-galactopyranosyl)kaempferol(12)、isorhamnetin-3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(13)、trillitscho side S6(14)、20-hydroxyecdysone(15)、(23S,25S)-17α,23,27-trihydroxyspirost-5-en-3β-yl-O-α-Lrhamno-pyranosyl-(1-4)-β-Dglucopyranoside(16)、chonglouoside SL-13(17)。3、药理活性研究:通过对滇重楼茎叶提取物及其主要成分进行大鼠体外给药抗血小板聚集的影响研究,结果表明滇重楼茎叶总提取物和其中的主要黄酮类成分具有明显的抗血小板聚集的作用。4、质量研究:(1)薄层鉴别:以 isorhamnetin-3-O-β-gentiobioside、chonglouoside SL-13主要有效成分为对照品,建立滇重楼茎叶提取物的薄层色谱鉴别方法,该方法经方法学优化和耐用性考察,具有分离度高、专属性强和重现性好等优点,可用于滇重楼茎叶提取物的薄层鉴别。(2)特征峰的指认:利用HPLC,初步建立了滇重楼茎叶提取物HPLC图谱,并对其中的特征峰进行了指认,共指认了四个主峰,分别为kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranoside 7-O-α-L-rhamnopyranoside,isor hamnetin-3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside,isorhamnetin-3-O-β-gentiobioside,chonglouoside SL-13。(3)含量测定:参照《中国药典》2020版四部通则0512“高效液相色谱法”,对滇重楼茎叶中isorhamnetin-3-O-β-gentiobioside进行含量测定,通过一系列方法优化和方法学考察,建立了样品中isorhamnetin-3-O-β-gentiobioside含量测定方法,共测定了6批滇重楼茎叶药材,结果表明该方法检测成分有较好分离度,专属性和重现性较好,可用于滇重楼茎叶提取物中主要有效成分isorhamnetin-3-O-β-gentiobioside 的含量测定。[结论](1)完成滇重楼茎叶提取物的样品制备和化学成分研究,从中分离出24个化合物,已经解析出来的化合物有17个,其中13个黄酮类化合物,4个皂苷类化合物,另外有7个新化合物,基本明确滇重楼茎叶大极性提取物所含的化学成分。(2)滇重楼茎叶提取物和其中的主要化学成分大鼠体外给药抗血小板聚集研究结果表明,滇重楼茎叶总提取物及其中的主要黄酮类成分:isorhamnetin-3-O-β-gentiobioside(2)、7-O-α-L-rhamnopyranoside-kaempferol-3-O-β-D-glucopyrano side(3)、kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranoside 7-O-α-L-rhamnopyranoside(11)具有明显的抗血小板聚集的作用。(3)通过对滇重楼茎叶提取物及其主要成分薄层鉴别、特征峰指认及其含量测定等质量研究,初步建立了滇重楼茎叶提取物部分的质量控制方法。