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本研究首先以获得的池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)部分细胞色素P450基因序列为基础,运用RACE-PCR的方法获得池蝶蚌细胞色素CYP基因(以下简称Hs-CYP450)的全长cDNA。运用相关生物软件和在线软件对Hs-CYP450基因序列以及其蛋白的一、二、三级结构进行了初步分析。结果显示,Hs-CYP450基因全长1809bp, ORF框1431bp,共编码476个氨基酸;氨基酸组成成分中亮氨酸(Leu)含量最多,约9.5％,而最少的则是色氨酸,仅0.8%;通过疏水性分析显示,该蛋白属亲水性可溶性蛋白;二级结构预测显示该蛋白α螺旋(H)结构含量较多,约占46.22%,并均匀分布在蛋白中;β折叠(E)相对较少,约9.87%左右,多分布在两端。建立的系统进化树结果表明,Hs-CYP450基因序列与其他动物的细胞色素CYP基因有较高的同源性,在众多物种中和太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)同源性相对较高。 利用 Q-PCR技术检测池蝶蚌不同组织 CYP450基因的 mRNA表达情况。结果表明:该基因的 mRNA表达存在比较明显的组织差异性。基因在肝脏组织中表达量最高,其次是肾脏,分别是斧足的5.3倍、4.5倍。在性腺、心脏中的表达量次之,在血液、外套膜、鳃和闭壳肌中的表达量较低,斧足中表达量最低。 用不同浓度硫酸铜、高锰酸钾、敌百虫、二氧化氯粉刺激池蝶蚌后,在0h、24h、48h、96h四个时间点提取 RNA,反转录后进行荧光定量,定量结果显示:硫酸铜刺激后,池蝶蚌 P450基因的表达受到了抑制,各时间点的表达量均低于对照组;高猛酸钾刺激后,池蝶蚌 P450基因在肝脏中24h时表达量最高,在肾脏中96h最高,且都是当浓度在20mg/L时其表达量最高;敌百虫刺激后,该基因在肝脏中依然是24h较高,而肾脏中在48h时表达量较高,浓度为20mg/L时肝脏的表达量最高,浓度为10mg/L时肾脏的表达量最高;二氧化氯粉刺激后,肝脏和肾脏在24h的表达量都有所升高,但不是太明显,在浓度为200mg/L时,表达量较高。