【摘 要】
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目的:评价土家族药物黑老虎治疗大鼠佐剂性关节炎（AIA）模型的治疗效果及初步探讨其作用机制。方法:1.动物实验,雄性SD大鼠60只,随机分成正常组、模型组、甲氨蝶呤（MTX）组、黑老虎低剂量组（HLH-L）、黑老虎中剂量组（HLH-M）和黑老虎高剂量组（HLH-H）,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠尾根部皮下注射0.1ml完全弗氏佐剂（CFA）诱导建立大鼠AIA模型。自造模当天开始至第36天,
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目的:评价土家族药物黑老虎治疗大鼠佐剂性关节炎（AIA）模型的治疗效果及初步探讨其作用机制。方法:1.动物实验,雄性SD大鼠60只,随机分成正常组、模型组、甲氨蝶呤（MTX）组、黑老虎低剂量组（HLH-L）、黑老虎中剂量组（HLH-M）和黑老虎高剂量组（HLH-H）,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠尾根部皮下注射0.1ml完全弗氏佐剂（CFA）诱导建立大鼠AIA模型。自造模当天开始至第36天,MTX组:甲氨蝶呤（1mg/kg）,每周一次灌胃给药;黑老虎低、中、高剂量组每天一次灌胃给药,剂量分别为200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg;模型组:每日灌胃同体积0.3%CMC-Na溶液。造模后每天观察大鼠发病情况和精神状态,每3天称量大鼠体质量。从造模后第9天开始,每3天测量大鼠足体积及对四肢进行关节评分。治疗结束后,麻醉处死大鼠,腹主动脉采血,取材。小动物CT扫描大鼠后足,评价关节骨破坏程度,HE染色观察大鼠踝关节组织病理学变化,Bio-Plex悬液芯片试剂盒检测大鼠血清中IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12（p70）、IL-13、IL-17A、IL-18、G-CSF、GM-CSF、GRO/KC、IFN-g、M-CSF、MIP-1α、MIP-3α、RANTES、TNF-α、VEGF、MCP-1细胞因子的含量。2.细胞实验,观察黑老虎酸F（Seco-coccinic acid F,SCAF）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖的影响。将对数生长期的RAW267.4细胞接种至96孔板,随机分组,LPS组:加入终浓度0.1μg/ml的LPS;LPS+药物组:加入终浓度0.1μg/ml的LPS及浓度为2.5、5、10、20μM的SCAF,检测各组细胞存活率。结果:1.与正常组相比,模型组体重显著下降（P<0.001或P<0.0001）,足肿胀体积显著增加（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比,MTX组、HLH-M组和HLH-H组的足肿体积和关节评分指数均显著下降（P<0.05）,HLH-L组无显著差异（P>0.05）。2.与正常组相比,模型组和HLH-L组骨破坏严重,滑膜增生,关节腔隙狭窄消失,关节变形,滑膜组织有大量炎症细胞浸润;MTX组、HLH-M组和HLH-H组骨破坏程度较轻,关节平滑,关节结构完整。3.与模型组相比,MTX组大鼠血清中IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-7、GM-CSF、GRO/KC、MIP-1α、MIP-3α、VEGF、MCP-1、TNF-α和IL-6表达水平显著下降（P<0.05或P<0.01或P<0.001或P<0.0001）;HLH-L组大鼠血清中IL-7、GM-CSF、GRO/KC、MIP-1α、VEGF和MCP-1表达水平显著下降（P<0.05或P<0.01或P<0.001或P<0.0001）;HLH-M组大鼠血清中IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-7、GM-CSF、GRO/KC、MIP-1α、MIP-3α、VEGF、MCP-1、TNF-α和IL-6表达水平显著下降（P<0.05或P<0.01或P<0.001或P<0.0001）;HLH-H组大鼠血清中IL-1α、IL-1β、IL-7、GM-CSF、GRO/KC、MIP-1α、MIP-3α、VEGF和MCP-1表达水平显著下降（P<0.05或P<0.01或P<0.001或P<0.0001）。4.细胞实验结果:与LPS组相比,LPS+SCAF 20μM组能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的生长,P<0.0001。结论:1.黑老虎可有效改善AIA模型大鼠足肿胀度,增加体重,降低关节评分,保护骨关节,减少骨破坏。2.黑老虎治疗RA可能是由多种细胞因子共同作用的:通过抑制IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-7、GM-CSF、TNF-α、IL-6等促炎因子的释放,从而抑制炎症的发生发展;抑制GRO/KC、MIP-1α、MIP-3α、MCP-1等炎症趋化因子,阻断其对免疫细胞或其他相关细胞的趋化,减少炎症的发生,抑制破骨细胞活化,减轻骨破坏程度;抑制VEGF的表达,改变血管通透性,减少滑膜血管翳形成。3.Seco-coccinic acid F可以抑制由LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型的增殖和生长,推测其可能是黑老虎的抗炎活性成分之一。
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