大黄酸减肥以及改善代谢紊乱的机制研究

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目的:  考察大黄中发挥减肥作用的主要有效成分,并研究大黄酸对脂肪细胞、高脂餐诱导的C57BL/6小鼠以及db/db小鼠体重、血脂及血糖的影响;通过分子生物学实验方法探讨大黄酸减肥和改善代谢紊乱的作用机制,为进一步研究奠定前期基础。  方法:  1.诱导前脂肪细胞分化,通过观察大黄酸和大黄素对脂肪细胞模型分化的影响来筛选大黄中发挥减肥作用的有效成分。  2.db/db小鼠按照体重值以及血糖值随机分为3组,除对照组每天灌胃相应的蒸馏水外,其余两组分别灌胃大黄素以及大黄酸,灌胃量为100mgkg-1day-1。在灌药期间,每天进行称重以及记录摄食量,2周结束后,利用核磁共振仪来观察小鼠脂肪、流质以及肌肉的重量。  3.雌性C57BL/6小鼠经高脂餐饲料造模3个月后,按体重随机分为对照组(n=7)、大黄酸组(n=7),并设正常组(普通饲料,n=7)。大黄酸治疗量为100mgkg-1day-1。在治疗期间,每天记录体重量以及食物摄食量,治疗2周后,进行葡萄糖耐量试验、血清生化指标的检测。  4.雌性C57BL/6小鼠,根据体重随机分为三组,正常组(n=7)、大黄酸组(n=7)、高脂组(n=7)。正常组给予普通饲料,高脂组以及大黄酸组给予高脂餐饲料,大黄酸组治疗量为100mgkg-1day-1。预防治疗8周。在治疗期间,每两天记录体重量以及食物摄食量。预防治疗8周后,进行体温测试,葡萄糖耐量试验、血清生化指标的检测、脂肪组织电镜扫描实验、肝脏TG、TC含量测定等。  5.利用双荧光素酶报告基因系统筛选大黄酸是否为PPAR、LXR的配体,并且使用Real-time PCR检测技术,观察与脂质代谢相关的核受体转录因子靶基因的表达水平。  6.通过体外酶活检测试验,检测大黄酸发挥减肥作用是否通过抑制DGAT酶活性。  结果:  1.通过脂肪细胞试验以及db/db小鼠试验显示,大黄酸具有抑制脂肪细胞分化,降低db/db小鼠体重以及脂肪含量的作用,确定了大黄中发挥减肥作用的有效成分为大黄酸。  2.对高脂餐诱导的C57BL/6肥胖小鼠,大黄酸虽然不能降低模型小鼠的体重,但大黄酸降低了血脂中TG以及LDL-C的含量,以及改善了小鼠葡萄糖耐量。  3.大黄酸可以有效的阻止由高脂餐引起的体重增加,并且可以改善小鼠葡萄糖耐量,降低了血清中TC以及LDL-C的含量,升高了小鼠的体温,并且可以改善小鼠肝脏油脂情况。  4.通过检测报告基因转录活性,显示大黄酸可以降低PPARγ以及LXR的转录活性。并且RT-PCR实验表明大黄酸降低了PPARγ以及LXR靶基因的表达水平。  5.体外酶活实验证明,大黄酸并不能抑制DGAT酶活性。  结论:  1.大黄酸可以改善由高脂餐引起的代谢紊乱,并且可以改善db/db小鼠模型的肥胖症状。  2.大黄酸改善脂质代谢以及糖代谢主要通过调节PPARγ以及LXR而实现的。并且大黄酸可能是PPAR-γ以及LXR的拮抗剂。
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