远志地上部分急性毒性实验及改善AD模型小鼠学习记忆作用研究

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阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种主要以记忆障碍和认知损伤为特征的慢性神经退行性疾病。学习记忆功能减退是AD患者的主要临床表现,从传统的中草药中开发毒性低、疗效好的改善学习记忆药物具有重要意义。远志地上部分又名“小草”,为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.的干燥地上部分,始载于《神农本草经》。目前国内一些省份的中药饮片炮制规范已将“小草”收录其中,记载其用于治疗惊悸、健忘、咳嗽痰多、痈疮肿毒。研究证实远志地上部分含有黄酮类、皂苷类、多糖类等多种化学成分,具有抗氧化、抗炎等生物活性。本课题组前期研究发现远志地上部分具有良好的延缓机体衰老效果,而衰老则是AD发病及记忆力减退的一个重要因素。故本文以远志地上部分为研究对象,通过急性毒性实验评价其用药安全性,并对其改善AD模型小鼠学习记忆作用开展了相关研究,为远志地上部分的开发积累了实验资料。本文的主要研究内容和结果如下:1.对远志地上部分进行了急性毒性实验研究。结果显示,未测得LD50,故进行最大给药量实验;给药组小鼠均未见死亡和中毒情况,且体重、血液生化指标(ALT,AST,BUN,Crea)、脏器指数与正常对照组比较均无显著性差异(P>0.05),主要脏器也均未出现明显病变;最大给药量为20 g/kg提取物(折合原生药80 g/kg),为成人最大临床日用量的533.3倍。2.采用东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍模型,研究远志地上部分改善学习记忆的作用。远志地上部分给药后能够缩短Morris水迷宫实验的潜伏期并增加穿台次数,在跳台实验中能够延长潜伏期并减少错误次数,表明远志地上部分能够提高小鼠的学习记忆能力。与模型组比较,远志地上部分能提高小鼠海马和皮层中ACh和ChAT水平,降低AChE水平,调节胆碱能神经系统;提高海马和皮层中神经营养因子BDNF的水平;降低海马和皮层中IL-1β水平并提升IL-10水平,抑制炎症反应。此外,远志地上部分还能够提高脑组织抗氧化酶SOD、GSH水平,并抑制脂质过氧化物MDA生成。3.采用D-半乳糖联合亚硝酸钠致AD小鼠模型,研究远志地上部分改善学习记忆的作用。Morris水迷宫实验、跳台实验、避暗实验结果均显示远志地上部分能明显提高小鼠的学习记忆能力,高剂量组与远志根组的治疗效果相当,行为学成绩无显著性差异(P>0.05)。与模型组比较,远志地上部分能够提高小鼠海马和皮层中ACh和ChAT水平,降低AChE水平;降低海马和皮层中IL-1β水平并提升IL-10水平;提高脑组织抗氧化酶SOD、GSH水平,同时抑制MDA生成。采用Western blot、RT-qPCR和免疫组织化学法研究远志地上部分对BDNF-TrkB信号通路的影响,结果显示远志地上部分能够提高小鼠海马组织BDNF、TrkB蛋白和mRNA的表达,上调海马CA1区BDNF、TrkB的蛋白表达。
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