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目的本课题通过检测糖尿病小鼠血管内皮细胞中CD34、VEGF蛋白水平的表达,研究CD34、VEGF蛋白表达与高血糖及波动性高血糖的关系,并分析CD34、VEGF蛋白表达的相关性,尝试从新的角度对糖尿病血管并发症的发生发展进行初步探讨,对深入阐明波动性高血糖促进糖尿病慢性血管并发症的病理机制,为糖尿病慢性血管并发症的防治开辟新的途径。方法本课题采用前瞻性研究方法,选取10例正常血糖组(对照组)、20稳定性高血糖组和20波动性高血糖组(二组为实验组)小鼠腹主动脉组织的石蜡标本,采用免疫组化SP法检测CD34、VEGF蛋白水平的表达的表达。运用方差分析、卡方检验及Spearman等级相关进行统计学分析。结果1 HE染色结果在光镜观察下,通过对血管壁比较发现,在稳定性高血糖组未发生明显血管壁损伤的形态学改变,在波动性高血糖组仅发生管壁增厚变硬,平滑肌细胞增生,少量胶原纤维弹力纤维和蛋白多糖等结缔组织基质形成等形态学改变。2免疫组化染色结果(1)CD34在正常对照组呈阳性或强阳性胞质内或胞膜表达,阳性表达率为90.0%(9/10例),在稳定性高血糖组中等强度阳性表达、在波动性高血糖组呈弱阳性或阴性表达,阳性表达率为35.0%(14/40例),实验组和对照组组间比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);CD34蛋白在稳定性高血糖组呈中等强度或弱阳性表达,阳性表达率为55.0%(11/20例),而在血糖波动组组则呈明显下调的弱阳性或缺失表达,阳性表达率为15.0%(3/20例),两组比较具有统计学差异(P<0.01)。(2)VEGF在正常对照组中100%呈现细胞膜的胞质或胞膜的缺失表达;在稳定性高血糖组中等强度阳性及在波动性高血糖组呈强阳性表达出现胞质或胞膜的异常表达,其阳性表达率合计为85.0%(34/40例),实验组和对照组比较,具有统计学差异(P<0.01);VEGF波动性高血糖组的异常表达率(100%(20/20例))明显高于稳定性高血糖组(70.0%(14/20例));统计分析显示,VEGF的异常表达的表达有统计学意义。(3)在血糖正常组腹主动脉组织中,CD34与VEGF的异常表达呈负相关关系(r=-0.3250 P=0.0045);(4)在稳定性高血糖组腹主动脉组织中,CD34与VEGF的表达有负相关趋势,但无统计学意义(r=-0.1540 P=0.5030);(5)在波动性高血糖组腹主动脉组织中,CD34与VEGF的表达呈负相关关系(r=-0.2950 P=0.0301);结论(1)CD34在正常组组织中出现较一致的高表达,而CD34蛋白在稳定性高血糖组的中等表达、在波动性高血糖组中明显低表达的现象,可以推测CD34作为早期干/祖细胞标志,在外环境血糖浓度的变化下能诱导内皮细胞生长因子等发生协同作用,影响其作为内皮细胞表面的标志物的表达,说明成体干/祖细胞在特定的刺激因子作用下的分化可能会受到抑制。(2)VEGF在稳定性高血糖组和波动性高血糖组中显示有意义的血管内皮细胞异常表达,可能参与了血管内皮损伤发生发展过程,且极有可能发生在早期。VEGF的异常表达与糖尿病的程度有关。可以推测VEGF在诱导血管病变的发生和发展起关键作用,参与血管生成,VEGF可促进血管损伤进展的速度和程度。在血糖正常组腹主动脉组织中,CD34与VEGF的异常表达呈负相关关系,提示了VEGF表达的异常可能是血管内皮细胞生长异常的原因之一。(4)在稳定性高血糖组腹主动脉组织中,CD34与VEGF的表达有负相关趋势,但无统计学意义。(5)在波动性高血糖组腹主动脉组织中,CD34与VEGF的表达呈负相关关系,提示CD34的异常表达可能是因为内皮功能失衡。(6)在糖尿病早期,血管在形态学改变上往往不明显,因此,在疾病早期尚无明显症状,但是血管内皮功能及相关蛋白会出现异常改变,此为糖尿病血管病变发生的信号。