【摘 要】
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目的:（1）探究AVIL基因在胃正常黏膜细胞中过表达对其增殖迁移的影响,为进一步研究AVIL在胃癌中的作用奠定基础。（2）针对AVIL基因设计了一种小分子抑制剂Sc-59,探索Sc-59在体外对胃癌细胞增殖迁移、细胞周期和凋亡的影响以及体内抗肿瘤活性。方法:（1）利用PCR技术扩增目的基因,经酶切将目的基因转入GV358载体中。得到重组慢病毒载体,用PCR和测序对其进行鉴定后与慢病毒包装系统质粒共
【基金项目】
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项目名称:Micro1271 靶向新癌基因AVIL在胃癌发生发展中的调控机制研究,项目合同编号:2017GXNSFAA198065,项目来源:广西自然科学基金,项目起止时间:2017年9月至2020年9月
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目的:（1）探究AVIL基因在胃正常黏膜细胞中过表达对其增殖迁移的影响,为进一步研究AVIL在胃癌中的作用奠定基础。（2）针对AVIL基因设计了一种小分子抑制剂Sc-59,探索Sc-59在体外对胃癌细胞增殖迁移、细胞周期和凋亡的影响以及体内抗肿瘤活性。方法:（1）利用PCR技术扩增目的基因,经酶切将目的基因转入GV358载体中。得到重组慢病毒载体,用PCR和测序对其进行鉴定后与慢病毒包装系统质粒共同转染293T细胞。用重组病毒颗粒感染GES-1细胞,筛选过表达AVIL的细胞。qRT-PCR检测稳转细胞AVIL mRNA的表达水平,CCK-8、划痕和Transwell迁移实验测AVIL过表达后的细胞增殖迁移能力。（2）以不同浓度的Sc-59分别干预胃癌细胞系（SGC-7901,MGC-803,AGS）和正常胃黏膜细胞（GES-1）24 h,通过CCK-8实验检测药物的半抑制浓度（Ic50）值,通过划痕和Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,通过流式细胞术检测细胞周期和凋亡分布。（3）SGC-7901接种于裸鼠皮下制备胃癌裸鼠移植瘤模型,20 mg/kg/d Sc-59皮下注射2周,游标卡尺测量裸鼠肿瘤体积以确定Sc-59的抑瘤效果,裸鼠内脏HE染色结果为指标检测Sc-59的毒性作用,通过Western blot和免疫组化实验检测裸鼠瘤块AVIL蛋白的表达水平,PCR实验检测裸鼠瘤块AVIL mRNA的表达水平。结果:（1）测序结果显示AVIL过表达慢病毒载体构建成功,GV358-AVIL重组病毒和GV358-NC病毒液浓度滴度是1×10~8tu/m L,转染GES-1细胞后荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果显示过表达组AVIL表达水平明显增高（p<0.01）,GES-1-AVIL组的增殖能力在24 h、48 h、72 h较对照组有增强,差异有统计学意义。此外,GES-1-AVIL组细胞愈合率高于GES-1组和GES-1-NC组,且GES-1-AVIL穿过上室的细胞数高于GES-1组和GES-1-NC组。（2）Sc-59呈浓度依赖抑制三株胃癌细胞生存率,Sc-59干预24 h后,AGS细胞、SGC-7901细胞、MGC-803细胞的Ic50分别为:40.29±1.93μmol/L,48.09±1.91μmol/L,60.76±1.64μmol/L,正常胃黏膜细胞GES-1的Ic50为:132±4.2μmol/L。划痕实验和Transwell迁移实验显示Sc-59干预三株胃癌细胞24 h后,细胞迁移能力降低。流式实验结果显示Sc-59干预三株胃癌细胞24 h后,细胞凋亡率增加,G2期细胞增加,G1/S期细胞下降。（3）20 mg/kg/d的Sc-59可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长（n=5,p<0.05）,而对裸鼠的体重没有影响,Sc-59组裸鼠瘤块中AVIL蛋白的表达与对照组相比被Sc-59下调了,Sc-59组和对照组中裸鼠瘤块AVIL mRNA的表达结果无统计学差异。结论:（1）成功构建过表达AVIL慢病毒载体。该载体能稳定转染GES-1细胞并对其增殖迁移有促进作用。（2）AVIL小分子抑制剂Sc-59在体内外均有抗胃癌作用。
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