血吸虫病广泛流行于全世界76个国家和地区,是一种重要的人兽共患寄生虫病,虫卵是其主要的致病因素。我国流行的是日本血吸虫病。世界卫生组织认为药物和疫苗结合使用是长期有效控制血吸虫病的策略。目前治疗血吸虫病的药物主要有吡喹酮和青蒿素两种,品种单一而且治病机制不明确,长期使用将会导致抗药性的出现；另一方面,临床上尚缺乏有效防治血吸虫病的疫苗。因此,亟待发现有效的抗血吸虫疫苗和新药物,其前提是新疫苗和药物靶点的发掘。酪氨酸酶(Tyrosinase)在吸虫类动物产卵过程中发挥着重要的作用。在本研究中,从日本血吸虫基因库中,检索出编码两种酪氨酸酶蛋白(SjTYR1,SjTYR2)的编码序列。使用生物信息学方法对序列进行分析并与其他物种同源蛋白氨基酸序列进行比对分析。编码两种酪氨酸酶的序列中都具有典型的酪氨酸酶结构域,包括两个铜离子结合区和一个高度保守的半胱氨酸富集区。与其他物种同源蛋白序列联配分析结果显示,与人源的同源序列相似度较低(仅为24%),可作为潜在的药物靶点。使用Real-time PCR分析不同时期的雌雄虫体内两种酪氨酸酶的转录差异,结果显示,不同时期的雄虫体内两种酪氨酸酶的转录水平均维持在接近于零的水平；在雌虫体内,两种酪氨酸酶从24天开始出现激增,至28天转录水平出现相对最高值。对两种酪氨酸酶进行了体外重组表达,将SjTYR1, SjTYR2勺全长序列插入到pSJ2载体中,使用大肠杆菌Rosetta Gami(DE3)进行表达,获得不可溶蛋白,除了全长蛋白表达外,SjTYR1,SjTYR2均出现较小分子量的蛋白表达,经质谱鉴定后为目的片段的截短表达蛋白；使用镍柱纯化后溶解于8M尿素中,获得纯度较高的重组蛋白。使用SjTYR1,SjTYR2重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法测定两组重组蛋白的免疫兔血清的抗体滴度,抗体滴度值均达到1：512000,使用Western blot检测SjTYR1,rSjTYR2均具有很好的免疫原性,并且检测出rSjTYR2的兔多抗对SjTYR1也能识别,rSjTYR1的兔多抗对SjTYR2的全长表达片段能够识别,对截短表达片段不能识别。使用制备的抗rSjTYR1,rSjTYR2兔多抗对虫体蛋白进行Western blot检测,抗rSjTYR1兔多抗能够识别出大小约为100KDa勺目标片段,预测虫体内酪氨酸酶以二聚体的形式存在。使用重组蛋白免疫小鼠进行免疫保护实验研究,结果显示,经rSjTYR1免疫后的小鼠减虫率达到31.4%,减卵率达到了52.1%；经rSjTYR2免疫后的小鼠减虫率达到29.5%,减卵率为8.4%。使用RNA干扰的方法对两种酪氨酸酶SjTYR1和SjTYR2的功能进行进一步探究,化学合成的siRNA对日本血吸虫进行体外浸泡法进行干扰7天后,使用RT-PCR检测SjTYR1和SjTYR2的转录水平,结果显示siTyr1-1和siTyr2-1有较明显的干扰效果,使用SjTYR1和SjTYR2勺干扰片段同时进行干扰时效果更为明显,形态学上均未观察到干扰效果。