论文部分内容阅读
目的:1、本研究旨在寻找α-内收蛋白(α-adducin,ADD1)基因上原发性高血压的易感性位点,并探索基因与环境因素之间的交互作用对原发性高血压发病的影响;2、探索研究ADD1基因启动子区域甲基化水平与原发性高血压发病的关系,进而深入认识原发性高血压的病因机制,为宁波市汉族人群高血压的预防和药物研发提供理论依据。方法:1、以性别、年龄为匹配因素进行1:1成组匹配,确定宁波市汉族居民2040人作为病例对照研究的研究对象,其中病例组1020例,对照组1020例。采用调查问卷的方式获得研究对象的个人信息、身高、体重、吸烟史、饮酒史、疾病史等基本资料,通过实验室检查获得总胆固醇、甘油三酯、血糖、高密度脂蛋白等生化指标。运用血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA,采用Tm-shift基因分型方法检测ADD1基因上tagSNP基因多态性。2、在第一研究阶段样本基础上,以性别和年龄为匹配条件随机抽取33例高血压患者和33个正常人作为探索研究ADD1基因启动子区甲基化水平与原发性高血压发病关系的研究对象。运用焦磷酸测序技术检测ADD1基因启动子区的甲基化水平。采用多因子降维法(Multifactor-Dimensionality Reduction,MDR)分析基因与环境因素之间的交互作用。结果:1、甘油三酯、体质指数及饮酒情况与高血压发病存在关联性(P<0.05),其中甘油三脂浓度过高者发生高血压的危险是正常者的1.537倍;而肥胖者发生高血压的危险则是体质指数正常者的1.235倍;另外,饮酒者发生高血压的风险是不饮酒者的7.151倍。2、研究表明rs3755885、rs2071694、rs4963及rs3775067的基因型分布与等位基因频率在病例组和对照组间不存在统计学差异(P>0.05),而rs4961-T等位基因在女性中与原发性高血压发病相关,且携带rs4961-T等位基因的人群患高血压的风险性是携带G等位基因的0.79倍。另外,遗传学显隐性模型分析结果表明,在男性中rs4961-GT+TT基因型与GG基因型间高血压发病风险存在显著性差异,且GT+TT基因型高血压发病风险仅为GG基因型的0.67倍;而在女性中随着GG、GT、TT基因型的依次变化,高血压的发病风险则逐渐降低。3、ADD1基因上tagSNP的单倍型分析结果表明,rs3755885(C/G)、rs3775067(C/T)、rs4961(G/T)和rs4963(C/G)四个位点存在遗传连锁现象,其中单倍型GCTG是原发性高血压发病的保护因素(OR=0.86,95%CI=0.76-0.97),而单倍型GTGC(OR=1.47,95%CI=1.20-1.79)和单倍型GCGG(OR=3.08,95%CI=1.93-4.90)是原发性高血压发病的危险因素。4、MDR分析基因多态性与环境因素交互作用结果表明,体质指数、高密度脂蛋白和饮酒情况三者间在原发性高血压的发病中存在交互作用,但未发现基因与环境因素间的交互作用。5、第二部分的研究表明ADD1基因启动子区甲基化水平在各个相邻位点间存在一定的相关性,其中CpG2至CpG5四个位点的甲基化水平关联性很强(r>0.80, P <0.01)。6、ADD1基因启动子区甲基化水平在男女性别间具有显著差异,研究表明女性中CpG1位点甲基化水平(Women versus Men (%):10.58±2.63versus9.25±1.40,P=0.016)与CpG2-5位点甲基化水平(Women versus Men (%):31.16±5.58versus27.17±7.56,P=0.021)显著高于男性。另外,研究结果显示女性中ADD1基因启动子区甲基化水平绝经前要显著高于绝经后(CpG1: P=0.006; CpG2-5: P=0.034)。7、研究还表明ALT和AST水平在女性中与原发性高血压间具有相关性,且病例组的ALT(EH versus Non-EH:18.7±11.2versus10.8±5.2,P=0.012)和AST水平(EHversus Non-EH:23.4±5.6versus18.7±3.6,P=0.008)要显著高于对照组,ALT和AST浓度升高可能是高血压发病的危险因素。8、研究发现ADD1基因启动子区甲基化水平与原发性高血压的关联性在男女性别间具有显著性差异,其中CpG1位点甲基化水平在女性中与高血压发病具有显著相关性(P=0.042),而CpG2-5位点甲基化水平在男性中与高血压发病显著相关(P=0.008)。结论:1、甘油三脂、体质指数及饮酒习惯是宁波市汉族居民原发性高血压的主要危险因素。2、在女性中rs4961与原发性高血压发病存在相关性,且携带rs4961-T等位基因的人群患高血压的风险性仅为携带G等位基因的0.79倍。3、ADD1基因上rs3755885(C/G)、rs3775067(C/T)、rs4961(G/T)及rs4963(C/G)间存在遗传连锁现象,其中单倍型GCTG是高血压发病的保护因素,而单倍型GTGC和单倍型是高血压发病的危险因素。4、体内的ALT和AST水平在女性中与原发性高血压间具有显著相关性,且ALT和AST浓度升高可能是高血压发病的危险因素。5、ADD1基因启动子区甲基化水平在男女性别间具有显著差异,且女性中ADD1基因甲基化水平要高于男性。另外,ADD1基因启动子区甲基化水平与原发性高血压的关联性在男女性别间也具有显著性差异,其中CpG1位点甲基化水平在女性中与高血压发病具有显著相关性,而CpG2-5位点甲基化水平在男性中与高血压发病显著相关。