天葵抗TMV有效成分提取分离及其制剂研究

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烟草花叶病毒病是烟草种植业上的重要病害之一,由于植物病毒的绝对寄生性,使其难于防治,目前国内外缺少高效的抗病毒药剂。随着人们生活水平的提高,环境问题备受关注。抗病毒剂向低毒、低残、高效及环境和谐的方向发展是一种趋势。本文从天葵(Semiaquilegia adoxoides(DC)Makino)块根中提取分离抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的活性成分,为植物源抗病毒活性成分的筛选提供重要的理论依据与实践指导。在本实验室以往研究的基础上,通过继续分离纯化天葵有效组分,采用半叶枯斑法进行活性追踪,筛选出天葵萃取物中抗TMV的活性组分TK和有效成分TK-1;经过剂型加工,初步研制出了20%TK水乳剂系列制剂。取得了一些有价值的试验结果。1.本研究对天葵萃取物的化学成分进行了较为系统地预试验。结果表明:天葵初提物中含有糖类、有机酸、蒽醒、酚类、挥发油等成分。2.采用半叶枯斑法测定了天葵萃取物抗TMV的生物活性。生物活性结果表明,天葵萃取物抗TMV的生物活性随处理时间不同而不同,抑制增殖作用结果说明TMV在接触心叶烟后的2h内是其侵染期,2h后TMV已经侵染并已开始大量增殖。治疗作用施药时间以接种后1h处理为最佳。天葵提取物与等量的TMV混合30min后处理可达到最佳钝化作用防治效果。3.研究确定了天葵有效成分提取分离的一般方法和流程,即先将天葵根粉粗提物经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水依次萃取,然后采用薄层层析和柱层析相结合的方法分离。氯仿萃取物浸膏(B)经过氯仿.甲醇梯度洗脱(83:17)得有效组分B4-3,其保护和治疗作用是52.54%和48.69%;乙酸乙酯萃取物浸膏(C)经过氯仿-甲醇梯度洗脱(75:25).得有效成分C5-5,其保护和治疗作用为42.98%~62.07%。4.进行了20%TK-1水乳剂系列制剂的研究,初步确定了2号水乳剂的配方及其质量控制指标。该水乳剂有效成分为TK-1,溶剂为二甲亚砜,乳化剂为OX-7513,分散剂为乙二醇,抗冻剂为羧甲基纤维素钠,助剂为pH调节剂、增稠剂、着色剂、气味调节剂。经剂型加工和质量检测,各项质量控制指标良好。5.研究了2号水乳剂在烟叶上的抗TMV生物活性。结果表明,在心叶烟(Nicotiana ghutinosa)上的活体保护、治疗和钝化作用抑制率分别为62.05%、64.28%和68.64%;在普通烟K326(Nicotiana TabIeacum var)上抗TMV的防治效果为68.64%。2号水乳剂的ED50为724.44mg/L,回归方程为y=1.0501x+2(r=0.9874*)。
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