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蛹虫草多糖是蛹虫草中含量最丰富的一种活性成分,具有保肝、诱导细胞凋亡、抗氧化和抗炎等多种药理学活性。大量研究结果表明多糖经化学修饰后可以显著增强其生物活性。因此,开展关于蛹虫草多糖的化学修饰与结构改造等方面的研究,对开发利用我国的珍稀药用菌资源具有重要的学术意义,而且对蛹虫草天然药品和保健品的开发也具有一定的指导意义。 本研究以蛹虫草子实体为试验材料,考察原料质量浓度、提取时间和超声波功率三个因素对多糖提取率的影响,并采用响应曲面法优化超声波辅助提取蛹虫草多糖的工艺条件,结果表明最优工艺条件为:原料质量浓度0.0232g/mL、提取时间39.8min和超声波功率103W。在此条件下,多糖的提取率为8.15%。扫描电子显微镜(SEM)和傅里叶变换红外光谱(FT-IR)结果表明,超声波辅助提取可以促使蛹虫草多糖的溶出。 紫外光谱分析表明,蛹虫草多糖中不含核酸,含有微量的蛋白质;通过DEAE-Cellulose-52阴离子交换柱层析获得酸性多糖组分CMPS,对CMPS进行乙酰化、磷酸化和硫酸化修饰所得的多糖衍生物分别记为Ac-CMPS、P-CMPS和S-CMPS,它们的取代度分别为0.96、0.40和0.39,傅里叶变换红外光谱(FT-IR)分别呈现出乙酰基、磷酸基和硫酸基的特征吸收峰。原子力显微镜(AFM)和扫描电子显微镜(SEM)结果表明,与CMPS相比,Ac-CMPS、P-CMPS和S-CMPS的表面形态均发生明显变化。圆二色谱(CD)分析表明,CMPS经乙酰化、磷酸化和硫酸化修饰后,其衍生物的空间结构发生明显变化,在190~250nm范围内存在最大和最小吸收峰,呈现出负Cotton效应。 体外抗氧化试验表明,蛹虫草多糖及其衍生物的抗氧化活性与其浓度呈现正相关性。与CMPS相比,Ac-CMPS和S-CMPS清除DPPH自由基的活性分别提高了29.15%和11.91%,而P-CMPS清除DPPH自由基的活性降低了36.38%;Ac-CMPS和S-CMPS的总还原能力略有升高,而P-CMPS的总还原能力略有降低;P-CMPS和S-CMPS螯合Fe2+的能力分别提高了37.67%和47.17%,而Ac-CMPS螯合Fe2+的能力降低了1.95%;P-CMPS和S-CMPS清除羟自由基的活性分别提高了17.02%和28.10%,而Ac-CMPS清除羟自由基的活性降低了48.87%。 体外抗肿瘤试验表明,蛹虫草多糖及其衍生物对肝癌细胞HepG2和胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用与其浓度呈现正量效关系。与CMPS相比,P-CMPS对肝癌细胞HepG2增殖的抑制活性提高了7.08%;S-CMPS对胃癌细胞SGC7901增殖的抑制活性提高了47.04%。