鱼类的非特异性细胞毒性细胞(NCC)在进化上是自然杀伤细胞(NK)的前体细胞,与NK细胞的功能等同,而且这种免疫细胞从鱼类到哺乳动物的进化是保守的。NCC主要来源于血液和淋巴器官,是鱼类防御病毒、细菌、寄生性原生动物等入侵的第一道防线,在鱼类非特异性免疫中起重要作用。目前的研究表明NCCRP-1受体蛋白位于NCC膜上,在鱼类炎症反应中可能通过颗粒胞吐途径参与抗菌的先天性免疫。NCCRP-1是NCC发挥功能的分子基础,在识别靶细胞和细胞毒性激活方面起着重要的作用。本论文以我国南方主要海水养殖鱼类之——红笛鲷(Lutjanus sanguineus)为研究对象,对红笛鲷NCCRP-1基因进行克隆和表达。用生物信息学方法对鱼类已知的NCCRP-1基因进行序列比对,根据序列保守区域设计并合成简并引物。从红笛鲷头肾组织中提取总RNA,应用RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得NCCRP-1基因全长cDNA序列。NCCRP-1基因全长为980 bp,完整开放阅读框(ORF)为702 bp,编码233个氨基酸,5′非编码区为42 bp,3′非编码区为236 bp。红笛鲷NCCRP-1与金头鲷NCCRP-1的同源率最高,为84%,而与哺乳动物NCCRP-1的同源率相对较低。将NCCRP-1基因与原核表达载体pET-21a进行连接,构建重组表达载体,然后转入E.coli BL21内进行诱导表达。在IPTG的浓度为0.8 mmol/L、37℃培养3 h条件下,目的基因表达效果最佳。本研究成功获得了高表达的重组目的蛋白,分子量与预期值相符,融合蛋白主要以包涵体形式存在,通过HisTrap HP柱子纯化融合蛋白。Western blot分析表明该融合蛋白可与相应抗体发生特异性结合,确切表明所表达出的蛋白为目的蛋白。应用Real-time PCR技术,以β-actin和GAPDH基因为内参,研究了NCCRP-1基因在感染溶藻弧菌后红笛鲷头肾、胸腺、肝脏、脾脏、心脏、鳃、肌肉和肠8个组织中的表达特性,分析了不同温度、盐度刺激4h后头肾组织中NCCRP-1基因的表达差异,实验结果表明,红笛鲷经溶藻弧菌感染4h后NCCRP-1基因在8个组织内均有表达,但在头肾中表达量最大,其次是在脾脏、肝脏,再次是在肌肉、鳃、胸腺和心脏,在肠中表达量最低;在温度22℃、盐度20的条件下,头肾组织中NCCRP-1基因的表达量较大。本论文的研究为红笛鲷疾病防治提供了一定的理论依据,丰富和发展了鱼类分子免疫学的研究内容,为进一步研究NCCRP-1蛋白的生物学特性以及在鱼类先天性免疫中的功能研究奠定基础。