研究背景冠状动脉粥样硬化性心脏病（Coronary Artery Disease,CAD）简称冠心病或缺血性心脏病、冠状动脉病,是由于冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而诱发的血管腔狭窄或阻塞,造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病。冠心病已是世界范围内的公共卫生问题,在美国大于等于20岁的成年人中,CAD的总患病率为6.7%,其中男性冠心病患病率为7.4%,女性为6.2%。《中国心血管病报告2018》中指出,目前我国冠心病的病例已超过了1100万,且患病率仍然保持增长的趋势。CAD的炎症假说表明,炎症因子与冠心病的风险相关。慢性的炎性环境会引发斑块不稳定或者破裂进而导致血栓的形成。炎症因子的释放和聚集会导致斑块纤维帽变薄,从而增加不稳定性。NLRP3炎性小体具有调控机体慢性炎症反应的功能,可以促使IL-1β和IL-18等炎症因子活化进而参与炎症反应。IL-18被称为具有―多效能‖的炎性因子,它通过诱导INF-γ的生成、血管平滑肌细胞的增殖和迁移、血管内皮细胞的凋亡来参与一系列炎症反应。NLRP3基因rs10754558（C/G）、IL-18基因rs187238（G/C）与rs1946518（C/A）多态性位点均位于相应基因的启动子区域,参与基因的转录和表达。本研究为避免传统观察性研究中的反向因果关联、混杂因素等对结果的干扰,使用上述SNPs作为工具变量,采用孟德尔随机化研究推断炎症小体活化通路相关细胞因子表型与CAD发生风险之间的关联。研究目的1、采用孟德尔随机化法,在基因型-表型、基因型-疾病结局之间关联成立的基础上,推断炎症小体NLRP3水平与冠心病风险之间的关联。2、基于系统综述和原始研究的数据,采用孟德尔随机化法,在基因型-表型、基因型-疾病结局之间关联成立的基础上,推断IL-18水平是否与冠心病风险增加有关。研究方法1、病例对照研究设计:依托东南大学附属中大医院心内科获得研究对象,研究对象均接受冠状动脉造影检查,确诊为冠心病的患者作为病例组,未确诊的个体作为对照组,进行流行病学调查与血样标本采集。2、实验室研究:采用ELISA方法测定血清NLRP3、IL-18水平;获得研究对象外周血并提取基因组DNA,采用RFLP-PCR的基因分型方法,检测研究对象的NLRP3基因rs10754558（C/G）的多态性。3、孟德尔随机化法研究:NLRP3基因rs10754558（C/G）、IL-18基因rs187238（G/C）与rs1946518（C/A）作为工具变量,结合血清学相关表型NLRP3、IL-18水平,验证基因型-表型、基因型-疾病结局之间的关联,进而推断相关细胞因子（表型）与CAD风险之间的因果关联。4、资料处理和分析:采用Epidata进行数据录入,数据使用SPSS22.0、STATA14.0进行统计分析。计量资料以均数±标准差（）表示并采用t检验,计数资料与哈迪-温伯格平衡检验比较采用χ2检验。采用Logistic回归、线性模型等分别构建回归模型,提取SNPs（Z）与CAD（Y）、SNPs（X）与细胞因子水平（X）的关联回归系数βZY和βZX,计算获得X-Y回归模型系数βXY=βZY/βZX。P<0.05定义为差异具有统计学意义。研究结果l、本研究共纳入614例研究对象,其中经CAG诊断为冠心病患者的病例组321人,排除冠心病的对照组293人。两组之间收缩压、舒张压、空腹血糖、甘油三酯、胆红素及肌钙蛋白的差异有统计学意义（P<0.05）。两组之间NLRP3水平、IL-18水平的差异有统计学意义,冠心病组均高于对照组（P<0.05）。2、NLRP3基因rs10754558（C/G）与冠心病风险以及NLRP3水平之间的关联均具有统计学意义,回归系数βZY=0.45,βZX=2.34,进而通过孟德尔随机化法推断出的NLRP3水平与冠心病风险的关联回归系数βXY=βZY/βZX=0.45/2.34=0.19。通过病例对照研究设计获得的NLRP3水平与冠心病风险的关联回归系数βXY=0.03。NLRP3水平与冠心病风险之间的关联具有统计学意义。3、IL-18基因rs1946518（C/A）与冠心病风险间的关联具有统计学意义,rs187238（G/C）与IL-18水平之间的关联具有统计学意义。但rs187238（G/C）与冠心病风险间的关联不具有统计学意义,rs1946518（C/A）与IL-18水平之间的关联未见统计学意义,进而使用孟德尔随机化法推断出的IL-18水平与冠心病风险的关联也不具显著性。因此,现有的关联证据不足以证明IL-18水平与冠心病风险存在因果关联。研究结论1、通过孟德尔随机化法验证了炎症小体NLRP3水平与冠心病风险之间的关联。2、现有的关联证据不足以证明IL-18水平与冠心病风险之间的因果关联。