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骨肉瘤是最常见的恶性骨肿瘤之一。尽管治疗模式不断发展,但因其肿瘤细胞的侵袭和迁移,导致其致死率居高不下。骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)是信号分子转录生长因子β(Transforming growth factor,TGFβ)超家族的一员,之前已有研究表明,它与骨肉瘤的生物学行为密切相关。有些文献报道,BMP2-8在骨肉瘤临床标本中均有不同程度的异常表达。但是,BMP9在骨肉瘤发生发展过程中的作用尚不清楚。本研究通过检测两株骨肉瘤细胞系中BMP9内源性表达后,将腺病毒感染表达相对较低的骨肉瘤细胞系,观察BMP9表达水平上调后,骨肉瘤细胞在细胞增殖,迁移,侵袭,凋亡,细胞周期,集落形成及裸鼠成瘤能力等方面的影响,为骨肉瘤的临床诊断及分子治疗寻求理论依据。方法1. HEK293细胞中AdBMP9的扩增并测定它的感染滴度。2.用RT-PCR及Western Blot的方法鉴定BMP9在143B、MG63和U-2OS细胞中的内源性表达,以及AdBMP9感染表达量相对较低细胞系143B后的BMP9的表达水平变化。3.将AdBMP9感染表达量相对较低细胞系143B后,用MTT检测细胞的增殖、划痕愈合实验检测细胞的迁移能力、Transwell实验检测细胞的侵袭能力、Hoechst染色实验和流式细胞术检测细胞的凋亡以及细胞周期、平板集落形成实验检测细胞的集落形成能力。4.分别将已经感染好病毒的各细胞组别按照一定的细胞数量接种于BALB/c-nu裸鼠后,20d左右颈椎脱臼处死,计算瘤体重量,体积,观察BMP9对裸鼠成瘤能力的影响。结果1. AdBMP9感染过后HEK293细胞中可观察到绿色荧光,加入病毒72h后感染率约90%左右;计算得出病毒滴度为:2×1011IU/ml。2. RT-PCR和Western Blot检测到143B、MG63和U-2OS细胞中均有BMP9的表达;且在143B细胞中的表达量最低。3. AdBMP9感染内源性表达BMP9低的143B细胞后,其BMP9表达明显增加,结果显示BMP9可在143B细胞中成功过表达。4.MTT实验结果显示:经AdBMP9处理的143B细胞48h后,143B细胞的增殖较对照组减少17%(P<0.05),72h后,143B细胞的增殖仍较对照组减少38%(P<0.05),提示BMP9可以抑制143B细胞的增殖。5.划痕愈合实验结果显示:经AdBMP9处理的143B细胞24h后,划痕愈合率为对照组愈合率的45%(P<0.05),提示BMP9可以抑制143B细胞的迁移。6. Transwell侵袭实验结果显示:经AdBMP9处理的143B细胞24h后,穿膜细胞数较对照组减少48%(P<0.05)。这提示BMP9可以抑制143B细胞的侵袭能力。7. Hoechst染色和流式细胞术结果显示:经AdBMP9处理的143B细胞24h后,凋亡率较对照组增加46%(P<0.05),48h后143B细胞的凋亡率仍较对照组增加63%(P<0.05),提示BMP9可以促进143B细胞的凋亡。8.流式细胞术结果显示:经AdBMP9处理的143B细胞更容易被阻滞在G2/M期。9.平板集落形成实验结果显示:经AdBMP9处理的143B细胞18d后,集落形成率较对照组减少48%(P<0.05),提示BMP9可以抑制143B细胞集落形成能力。10.裸鼠成瘤实验结果显示:经AdBMP9处理的143B细胞,接种于裸鼠后,可见瘤体重量和体积分别较对照组减小53%、49%(P<0.05),都明显小于对照组,提示BMP9可以抑制裸鼠成瘤能力。结论1.在HEK293细胞中可以将AdBMP9成功扩增。2.骨肉瘤细胞系143B、MG63和U-2OS中均有BMP9的表达,且在143B细胞中表达量最低。3.本实验中所应用的重组腺病毒AdBMP9可以在143B细胞中成功得以表达。4.BMP9能明显抑制143B细胞的增殖、迁移、侵袭、集落形成能力并促进其细胞的凋亡,体内试验中,BMP9还可以抑制裸鼠的成瘤能力,这些结果提示了BMP9可能参与了骨肉瘤的发生发展。