QCM免疫传感技术在宫颈癌变前检测的应用研究

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石英晶体微天平(Quartz Crystal Microbalance)是一种新型高灵敏度的质量传感器,由于其具有结构简单、成本低、检测速度快、测量精度可以达到纳克量级等优点,被广泛的应用于物理、化学、生物、医学等各个领域。QCM免疫传感器结合了QCM的高灵敏度和免疫反应的特异性,获得了研究人员的广泛关注,被广泛的应用于包括环境检测、食品安全、医学疾病诊断等各个领域。宫颈癌是所有女性疾病中致死率排名第二的恶性肿瘤,而在所有的恶性肿瘤中,宫颈癌也是最容易预防的恶性肿瘤。患者如果在宫颈癌的癌前病变时期得到了及时治疗,治愈的机会非常高,但该时期没有明显的临床症状,如果仅仅依靠临床表现无法对宫颈癌前病变进行诊断,而一旦宫颈癌前病变发展到浸润癌,病人一般会在2-5年的时间内死亡。因此,发展一种特异性强、灵敏度高的宫颈癌变前检测手段对宫颈癌的预防举足轻重。本文以压电免疫传感技术为基础,通过深入研究压电免疫传感器的检测机理,提出了一种宫颈癌变前检测的新方法。通过深入分析各种影响径向质量检测灵敏度的因素,搭建了适合宫颈癌变前检测的实验平台并设计了最适合该平台的实验方法,将该方法用于临床病人样本的检测,验证了该方法在宫颈癌变前检测中的合理性和有效性。本文的主要工作及创新点总结如下:(1)深入的分析了石英晶体微天平的检测机理,揭示了其具有高检测灵敏度的原因,同时,深入分析了石英晶体微天平表面振动位移分布情况,并以此为基础,详细研究了电极的半径、厚度及形状对石英晶体微天平质量检测灵敏度分布的影响,提出了提高质量检测灵敏度及改善质量检测灵敏度均匀性的方法,为石英晶体微天平的应用提供了理论基础。(2)研究了针对宫颈癌变前检测的特异性传感膜的制备方法。详细分析了各种特异性传感膜的制备方法,并通过实验从固化率、稳定性及免疫活性等各个方面对各种不同方法进行了比较,同时研究了环境温度、培育时间及抗体浓度等对传感膜固化率、稳定性及免疫活性的影响,最后提出了最适合用于宫颈癌变前检测的特异性传感膜制备方法及制备条件。(3)提出了一种基于QCM的宫颈癌变前检测的新方法。通过将该方法用于从四川大学华西附属第二妇女儿童医院获得的病人样本的检测发现,被测样本中P16INK4a蛋白的含量和宫颈病变程度密切相关,病变程度越高,P16INK4a蛋白含量越高,反之,病变程度越低,P16INK4a蛋白含量就越少,并且在不同的病变程度之间,P16INK4a蛋白的含量有明显的差异(p<0.05),具有统计学意义。因此,通过检测样本中P16INK4a蛋白的含量可确定被测对象的宫颈病变程度。通过将该方法的检测结果和病理医生的活检切片检查结果对比发现,该方法确定的病人病变程度和活检检测结果吻合度高。最后,本文还对该方法的特异性、稳定性、检测下限等性能进行了测试,为该方法的临床研究提供了基础。
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