废次烟叶中茄尼醇提取、分离纯化工艺研究

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茄尼醇是一种全反式结构的聚戊烯醇,主要是用来合成辅酶Q10和vitK2及作为一些抗癌药物的前体。Roland于1956年首次从烟叶中分离得到,茄尼醇主要存在于烤烟烟叶和马铃薯叶中。本文以茄尼醇纯品(茄尼醇含量>90%)为目标,开展了废次烟叶中茄尼醇的提取、分离纯化工艺研究。最终获得了茄尼醇精品(纯度为60%)。现将研究工作总结如下:1.先通过文献研究,综合国内外文献的基础上,对烟叶中的茄尼醇的提取、分离纯化及含量测定进行了综述。2.本课题对废次烟叶中茄尼醇进行了提取、分离和纯化,得到了纯度符合《新药审批办法》的茄尼醇对照品。以废次烟叶作为原料,用超临界CO2流体萃取废次烟叶得到茄尼醇浸膏,再用NaOH溶液水解,冷冻结晶、通过硅胶柱层析精制。获得了包括茄尼醇在内的四个化合物,使用1HNMR、13CNMR、DEPT谱鉴定了其中3个。分别是正二十二烷醇、茄尼醇、正二十三烷酸。3.建立了RP-HPLC法测定茄尼醇浸膏中茄尼醇的条件。色谱柱:Lichrospher C18柱(4.6 mm*250mm,5μm),流动相:甲醇:异丙醇=5:5,检测波长:210nm,柱温:25℃,流速:0.8ml·min-1。该方法简便、灵敏,加样回收率为99.36%,RSD为2.43%。并建立了茄尼醇浸膏的薄层色谱定性鉴定方法。为茄尼醇浸膏标准的提高及完善奠定了科学基础。4.优选了提取废次烟叶中的茄尼醇的最佳工艺。比较了超临界CO2流体萃取与溶剂回流提取的效果,发现超临界CO2流体萃取在茄尼醇纯度和提取率方面并无明显优势。故在溶剂回流提取的基础上,考察了甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、石油醚、氯仿、乙酸乙酯回流提取效果,结果发现石油醚、丙酮分别在茄尼醇浸膏纯度和提取率方面有优势。比较了索氏、回流、超声三种提取方法,最后确定用回流法提取废次烟叶中的茄尼醇。以茄尼醇的纯度和浸膏得率为指标,通过L18(37)正交试验法优选其最佳提取工艺为:提取溶剂为石油醚,浸泡3小时,浸泡溶剂量为4倍药材量。提取溶剂量为24倍(ml/g药材)药材量(第一次10倍量,第二次8倍量,第三次6倍量),药材粒度为20目,提取时间为2小时(第一次1小时,第二次0.5小时,第三次0.5小时)。5.确立了茄尼醇浸膏的水解工艺条件,水解时间为2h,水解温度为50℃,碱液浓度为6%,助溶剂乙醇体积为20ml/g浸膏,水解后茄尼醇纯度可达30%。6.本文采用大孔吸附树脂纯化水解后的茄尼醇浸膏,以比吸附量和解析率为指标,筛选了大孔吸附树脂的类型,结果以AB-8弱极性大孔吸附树脂为优。以吸附量为指标,用L9(34)正交设计表优选出最佳吸附工艺为:上样药液浓度为3.1mg/ml,树脂柱径高比为1:9,上柱吸附流速为1BV/h,吸附温度为室温(25℃)。依次用丙酮:乙醇梯度洗脱吸附茄尼醇的树脂,结果丙酮和乙醇的体积比例为(0:1,1:9,2:8)的洗脱液可以将吸附于树脂上的大部分茄尼醇进行有效洗脱,达到了纯化除杂目的,最终得到纯度为60%的茄尼醇。7.研究超声提取马铃薯叶中茄尼醇的工艺过程,以提取率为指标,提取溶剂为甲醇,再运用L9(34)正交试验得出工艺的最优条件为:提取功率为300 W,提取时间为20min,液料比(v/w)为30:1。
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