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北京地区的臭椿花叶病毒病是由马铃薯Y病毒属的一种病毒侵染所致。通过机械接种的方法将此病毒的臭椿分离物接种到昆诺藜、苋色藜、本生烟和蚕豆上,分别产生局部褪绿斑、局部褪绿斑、轻微花叶系统褪绿斑和局部褪绿斑等症状;但是该分离物不侵染葫芦科植物。ELISA分析显示此分离物与BCMV和WMV间具有血清学关系。对提纯的病毒进行SDS-PAGE和Western blot分析,测得其CP亚基的分子量为31.2 kD。
通过7次RT-PCR得到了WMV臭椿分离物基因组的全序列。序列分析结果表明:WMV-Ailanthus全序列共10045个核苷酸,5′-和3′-非翻译区序列分别为132和253个核苷酸,中间为9657个核苷酸的开放读框,编码一个长为3219个氨基酸、分子量约为366.95kD的多聚蛋白。此病毒基因组及其所编码的多聚蛋白的大小与其它马铃薯Y病毒属病毒较为相近。多聚蛋白含有9个可能的蛋白酶切位点,切割后产生的成熟蛋白产物中具有保守的氨基酸基序,这与其它potyviruses都非常相似。以上生物学特性的研究以及对其CP基因和3′-非翻译区序列的分析证明此病毒为西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus WMV)。
采用RT-PCR方法自WMV-Alianthus的基因组中扩增出其CP基因,连接到原核表达载体pET28a(+)上。获得的重组子pET-WMVCP转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,融合蛋白分子量约为35kD。将融合蛋白纯化后免疫兔子,获得了特异性较高的抗血清。酶联法测定效价为1/512。