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目的：分析rALR大ORF转录表达是否具有组织选择性。构建大鼠肝再生增强因子（rALR）大ORF和大小ORF之差(称之为X)的大肠杆菌重组表达质粒，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达它们。表达的目的蛋白纯化后用于体外活性鉴定，为进一步研究ALR的生物学功能奠定基础。方法：从大鼠睾丸和新生大鼠肝脏中提取总RNA为模板，用RT-PCR方法以两对带有不同酶切位点的引物，扩增rALR(大ORF)的cDNA片段，并将其克隆入质粒pET32a(+)中。再用PCR方法从重组质粒pET32a(+)-rALR扩增出X片断，并克隆入质粒pET32a(+)中。重组质粒pET32a(+)-rALR和pET32a(+)-X酶切、PCR和测序鉴定正确后，转化入相应的宿主菌BL21（DE3）中,在IPTG诱导下进行表达。表达产物 rALR-硫氧环蛋白融合蛋白和X-硫氧环蛋白融合蛋白经镍离子亲合层析柱纯化，纯化产物再经SDS-PAGE鉴定。用ELISA法检测表达产<WP=8>物的抗原性。3H-TdR掺入法测定表达产物对QGY细胞株的促增值活性。 结果：成功从大鼠睾丸中扩增出rALR(大ORF)的cDNA片段,但在新生鼠肝脏中没有扩出相应DNA条带。构建了rALR大ORF的大肠杆菌表达重组质粒pET32a(+)-rALR和pET32a(+)-X，目的蛋白以融合蛋白的形式获得高效表达，其分子量预计理论值相符合，分别为41kD和29kD，经镍离子亲合层析柱纯化，纯化产物经SDS-PAGE鉴定为单一条带；但所得的融合蛋白未能刺激QGY 细胞增殖。经ELISA证实，rALR大、小ORF和X的融合蛋白与抗hALR多克隆抗体反应均呈阳性，而空质粒表达产物(硫氧环蛋白)为阴性。结论：rALR大ORF的转录、表达具有组织选择性。rALR大ORF和X在大肠杆菌中被以融合蛋白的形式高效表达和成功纯化，为进一步的研究提供了物质基础；在体外融合蛋白未能刺激人肝癌细胞株QGY 的增殖，推测是受融合部分——硫氧还蛋白的影响；或者rALR大ORF的生物学功能并不在于促增值作用。