灰葡萄孢毒素对紫茎泽兰伤害机理研究——毒素作用后几类化学物质的变化分析

来源 :西南林学院 西南林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bee4832
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灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.)是一种植物病原真菌,该病菌的次生代谢产物中含有能伤害非寄主杂草的活性物质,对马唐、稗草和反枝苋等有显著抑制幼根幼芽生长的能力。利用病原真菌产生的毒素进行抑制和杀伤杂草试验报道较多,但真菌代谢生物除草活性物质作用机理的深入研究报道并不多,因此本研究在前人研究的基础上,进行了以下研究:培养灰葡萄孢病菌;提取其代谢产生的毒素;研究粗毒素对紫茎泽兰的杀伤活性;检测毒素作用后紫茎泽兰叶片内可溶性蛋白、可溶性糖、无机元素、挥发性成分含量的变化,抗病相关酶活性的变化;以及毒素作用诱发外渗电解质中可溶性蛋白、可溶性糖、无机元素、挥发性成分等物质含量的变化和外渗电解质对紫茎泽兰病原真菌孢子萌发和菌丝生长的影响。主要研究结果如下: 用麦麸谷糠培养基培养灰葡萄孢菌,乙酸乙酯浸泡含菌丝体的培养基,萃取分层,以紫茎泽兰离体叶片为生测对象分别检测乙酸乙酯相和水相的杀伤活性,试验表明,水相含有使紫茎泽兰致病的毒素物质。 以紫茎泽兰叶片为生测材料,测定了杀草毒素对紫茎泽兰叶组织细胞膜透性、可溶性蛋白、可溶性糖、无机元素含量变化的影响,实验结果表明:毒素作用后,细胞膜透性明显上升,且毒素浓度越大,作用时间越长,细胞膜透性就越大;细胞内可溶性糖、可溶性蛋白、无机离子等物质含量改变:可溶性蛋白含量减少,与新鲜叶片相比,毒素处理12h后叶片内含量下降32%;可溶性糖含量先增加后减少,在最初作用的3h内,可溶性糖含量增加近50%,随后含量减少,至12时,与新鲜叶片相比含量已减少70%;离体叶片细胞内Ca,K元素含量减少,Ca元素含量减少较多,约66%,而Mg,P,Fe,Zn,Mn元素含量有所增加,其中Mn元素含量增加最多,与新鲜叶片相比增加了2倍多;植株叶片细胞内Ca,K,Fe元素含量减少,K元素含量减少较多,约53.9%,Mg,P,Mn,Zn元素含量增加,以Zn元素含量增加最多,增加了近1倍;毒素破坏了叶片的细胞膜系统,造成细胞膜破裂诱发电解质的外渗,外渗的电解质中包含可溶性糖、可溶性蛋白和无机离子,其中渗漏液中的可溶性蛋白含量是毒素溶液的6.8倍,可溶性糖含量是毒素溶液的近2倍,渗漏液中Ca,K,Fe元素含量较之毒素溶液内含量增加,以钙元素含量增加最多(近30倍),Mg,P,Mn,Zn元素含量减少。 以紫茎泽兰叶片为生测材料,研究了粗毒素处理后叶片内5种抗病相关酶活性的变化,结果表明:浓度为2.5mg/ml粗毒素作用12h后,对过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等5种保护酶的活性都有抑制作用,在测定的3-12h内CAT,PPO和PAL 酶活力都呈现不同程度的下降趋势,经过12h的毒素处理,CAT活性比对照降低了66.7%,PPO酶活比对照组低10.1%,PAL酶活比对照组低79%;SOD和POD酶活力呈现先上升后下降的趋势,至12h时,毒素处理的SOD酶活比对照低65.2%,而POD酶活力比同时间对照低64.7%;对照组中CAT,SOD,POD,PPO,PAL,酶活性均呈上升趋势。采用气质联谱(GC-MS)测定挥发性成分变化(以符合度>80%,相对含量>0.1%为数据处理标准),结果表明:新鲜叶片的GC/MS分析得到39个化合物,其中包含有α-蒎烯等具代表性的单萜和倍半萜类化感物质,以及龙脑等抗菌活性物质,毒素处理后紫茎泽兰叶片内挥发性成分种类有所增加,毒素处理离体叶片的挥发性油中检测到60个化合物,毒素处理植株叶片内检测出54种化合物,其中脂肪族类,萜类成分种类增加,而芳香类化合物种类减少。 以拟盘多毛孢和链格孢菌为生测对象,用悬滴法和菌丝干重测定法检测毒素作用后紫茎泽兰电解质渗漏液、糖源物质、氮源物质、无机盐类、挥发性成分等对生测对象的孢子萌发和菌丝生长的影响:渗漏电解质对孢子萌发影响不明显,但毒素粗提液,渗漏电解质中包含的糖、无机离子、挥发性成分对孢子萌发有促进作用;渗漏液以及相关成分大都对菌丝生长有促进作用。毒素与病原微生物协同作用可以提高除草效果。
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