克氏原螯虾是我国重要的水产经济动物,目前面临的主要问题有:苗种繁育不足、养殖模式欠佳、单位面积产量低等。生物生理与行为的昼夜节律性是由其生物钟来调节的,它产生的内在节律的周期性约为24小时。cycle(Cyc)、clock(Clk)、timeless(Tim)、period(Per)、cryptochrome(Cry)等核心生物钟基因参与内在的调控机制,通过节律振荡得以让生物适应外界环境的变化。温度和光照都是影响生物钟的重要外源性环境因子。本文以克氏原螯虾的生物钟基因为切入点,探究不同光照模式和温度模式下克氏原螯虾生物钟基因节律振荡与生长发育的关系。这些结果有望为探索健康高效的养殖新模式提供思路和理论依据。主要研究结果如下:1.克氏原螯虾Pc Clk和Pc Cry1基因的序列和功能分析获得了Pc Clk的部分c DNA序列,含有一个183 bp的3’端非翻译区(UTR)和开放阅读框(ORF)1182 bp,可编码393个氨基酸,预测蛋白分子量大小为45.054 k Da;Pc Cry1基因全长序列为2006 bp,其中ORF 1650 bp,可编码549个氨基酸,5’UTR 116 bp,3’UTR 240 bp,预测蛋白分子量大小为63.167 k Da。Pc CLK蛋白分析显示氨基酸序列含有一个HLH结构域和一个PAS结构域。Pc CRY1含有一个DNA光裂合酶结构域和FAD结合位点结构域。多序列比对发现Pc Clk与甲壳类动物通讯鳌虾最相似,Pc Cry1与甲壳类动物斑点海虱和沙滩跳钩虾最为相似。2.克氏原螯虾Pc Clk和Pc Cry1基因在不同光照和温度作用下的组织表达特征分析应用荧光定量PCR技术分别检测不同光照和温度作用下克氏原螯虾不同组织中Pc Clk和Pc Cry1基因m RNA的表达情况。结果表明,Pc Clk在脑、眼柄、肝胰腺、性腺中均有表达。无论光照和温度如何变化,克氏原螯虾中Pc Clk基因在脑、眼柄、肝胰腺中都基本遵循着24小时的振荡节律。Pc Clk是内源性的节律基因,振荡不受外界环境因素变化的影响。Pc Cry1在脑、眼柄、肝胰腺、性腺中均有表达。无论光照和温度如何变化,Pc Cry1基因在各组织中也都基本有着24小时的昼夜振荡节律。在光照改变情况下,Pc Cry1基因m RNA表达差异显著。Pc Cry1的表达变化是内源性的,受光调控。3.克氏原螯虾不同培养模式下的生长探究选择了6组培养模式对克氏原螯虾进行生长指标的测定,结果显示在相对温度较低的条件下,克氏原螯虾生长缓慢,但成活率较高。当温度升高时,其成活率降低,但在一定程度促进了虾的生长。在同一温度下的三种不同光照模式,自然光显著提高了克氏原螯虾的生长状况,且设定的自然条件组(12LD,25℃)是相对理想的养殖模式。