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背景及目的：多发性硬化（multiple sclerosis，MS）作为一种自身免疫性疾病，其病理机制中涉及了免疫调节机制的失衡。耐受性树突状细胞（tolerogenic dendritic cell，TolDC）作为这个免疫调节机制中的重要一员，能诱导并维持中枢耐受和外周耐受。因此，人们认为体外培养的TolDC可以用于细胞治疗，在治疗自身免疫性疾病的过程中起到重建抗原特异性的免疫耐受的作用。本研究的目的是分析维生素D3的活性形式1,25(OH)2D3诱导的TolDC用于治疗MS的动物模型实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE）的治疗效果。方法：通过给予小鼠皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白33-55肽段（MOG35-55）及完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant，CFA）来构建EAE模型；提取小鼠的股骨及胫骨处骨髓细胞进行原代培养，在培养基中加入白介素-4及粒细胞巨噬细胞刺激因子，以诱导为树突状细胞（dendritic cell，DC）；TolDC的培养是在正常DC培养的基础上加入1,25(OH)2D3；采用流式细胞仪检测诱导后的DC的细胞表面分子表型，包括MHC-II、CD40、CD80、CD83及CD86，以鉴定是否符合TolDC的特征；最后将正常DC细胞及1,25(OH)2D3诱导的TolDC（简称为VdDC）分别回输EAE动物模型，以观察并比较空白对照组、阴性对照组、正常DC治疗组及VdDC治疗组的治疗效果，通过统计学方法分析发病时间的差异。①在处理流式数据的两组数值间比较时，采用t检验。②分析EAE的临床评分来评价各组治疗效果的差异是否有统计学意义时，采取重复测量数据的方差分析，并用Bonferroni方法进行两两比较。③在比较各组发病时间是否有差异时，采用Kaplan Meier法进行生存分析，两两比较时对P值进行Bonferroni校正。其余结果中，P<0.05为差异具有统计学意义。结果：通过记录临床症状评分，我们发现小鼠大约于免疫后第12天开始发病，症状在20天左右达到高峰。正常DC细胞和VdDC均在培养第十天时进行流式检测，发现正常DC组和VdDC组的CD11c+的DC细胞的比例分别为71.9%和92.8%； VdDC组与正常DC比较，表面的MHC-II（P=0.0002<0.001）、CD86（P<<0.001）表达下降，CD40（P=0.8475>0.05）、CD83（P=0.5022>0.05）稍有下降但无统计学差异，CD80（P=0.0023<0.05）有所升高。空白对照组、阴性对照组、正常DC治疗组及VdDC治疗组比较治疗后的临床评分时，4个组之间整体比较临床评分有统计学差异（P=9.4671×10-13<0.001）。然后进行两两比较：阴性对照组比空白对照组评分高1.38±0.12分（P=9.67×10-13<0.001），说明阴性对照组造模成功；正常DC治疗组比阴性对照组评分低0.51±0.12分（P=0.0092<0.05），这表明正常DC能够减轻EAE临床评分。VdDC组比阴性对照组评分低0.99±0.12分（P=6.88×10-9<0.001），说明VdDC回输EAE小鼠后同样减轻了其临床症状。正常DC组较VdDC组评分高0.47±0.12分（P=0.0024<0.05），两者之间临床评分有差异，说明回输VdDC比回输正常DC可以更大程度地降低EAE临床评分。最后我们统计了各组的发病时间，空白对照组从未发病，阴性对照组、正常DC治疗组及VdDC治疗组的各组发病时间中位数分别为13天、12天、14.5天，均数±标准差的值分别为12.5±0.3天、12.3±0.4天、14.6±0.4天。正常DC治疗组与阴性对照组比发病时间无统计学差异（P=0.859>0.016），即正常DC不能延缓EAE小鼠的发病时间；而VdDC组较阴性对照组发病延迟（P=5.47×10-4<0.001），证明1,25(OH)2D3诱导的DC细胞可以延缓EAE的发病；VdDC组较正常DC组发病也有所推迟（P=7.36×10-4<0.001）。结论：①本实验成功构建了小鼠EAE模型；②1,25(OH)2D3在体外诱导的DC细胞具备了TolDC的细胞表型；③1,25(OH)2D3诱导的DC细胞改善了EAE小鼠的临床症状，并且延缓EAE的发病时间。