辐照供者淋巴细胞促进非清髓造血干细胞移植植活的研究

来源 :复旦大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:dindin
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[目的] (1)体外研究γ射线辐照抑制小鼠淋巴细胞引起移植物抗宿主病(GVHD)的剂量——效应关系;(2)以小鼠异基因非清髓造血干细胞移植(NMT)为动物模型,研究γ射线辐照的供者淋巴细胞对于促进移植物植活的作用;(3)在临床NMT实践中,探讨供者淋巴细胞在NMT成功中的积极作用;(4)通过体外实验研究γ射线辐照对于人外周血淋巴细胞增殖能力和凋亡的影响,初步探讨γ射线辐照抑制人淋巴细胞引发GVHD能力的剂量——效应关系,研究不同辐照剂量对于淋巴细胞凋亡进程的影响。[方法] (1)以有丝分裂原刀豆球蛋白A(Con A)刺激后的小鼠淋巴细胞增殖反应为指标,研究不同剂量γ射线辐照对于小鼠淋巴细胞增殖的抑制率;(2)以雄性BALB/c(H-2d)小鼠为供者、雌性C57BL/6(H-2b)小鼠为受者,用非清髓性的全身照射结合环磷酰胺作为预处理方案,建立性别不合的异基因NMT小鼠模型,以单纯接受骨髓移植的小鼠为对照组,以同时接受辐照的供者淋巴细胞输注和骨髓移植的小鼠为实验组,以雌性小鼠骨髓细胞内是否出现Y染色体特异性基因为植活标记,比较对照组和实验组之间移植植活小鼠所占的比例,探讨经过一定剂量γ射线辐照的供者淋巴细胞是否具有促进NMT移植物植活的作用;(3)报告两例异基因NMT,采用CD34+细胞纯化技术获得足够数量造血干细胞并且去除了绝大部分供者淋巴细胞预防GVHD,从临床移植实践的经验和教训中探讨供者淋巴细胞对于NMT移植成功的有利和不利两方面的作用;(4)分别以模拟淋巴细胞体内接触抗原刺激后增殖的抗CD3单抗加白介素-2(IL-2)联合刺激和ConA刺激人淋巴细胞增殖,研究不同剂量的γ射线辐照对淋巴细胞增殖的抑制率,并且在抑制淋巴细胞增殖的基础上研究不同剂量γ射线辐照对于淋巴细胞凋亡比例和凋亡速度的影响。[结果](1)7.5Gy、15Gy和30Gy γ射线辐照均可抑制小鼠淋巴细胞增殖,其中7.5Gy辐照已经基本抑制了小鼠淋巴细胞增殖能力,其效应达到了30Gy辐照效应的近90%,可以消除淋巴细胞引起严重GVHD的危险;(2)在一定骨髓细胞输注量的条件下,未输注辐照供者淋巴细胞的对照组和输注辐照供者淋巴细胞的实验组之间比较,实验组移植植活小鼠所占的比例比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),证实辐照的供者淋巴细胞可以促进异基因NMT移植物植活;(3)临床两例异基因纯化CD34+细胞NMT,均获得了植活,在没有用其他GVHD预防措施条件下均未发生GVHD,证实非清髓预处理可以获得纯化CD34+细胞移植物植活,并可以消除GVHD。但是两例中一例后来发生了排斥反应、一例移植后复发,提示供者淋巴细胞在异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)中具有一定的积极作用;(4)在抗CD3单抗联合IL-2刺激和ConA刺激人外周血淋巴细胞增殖反应中,7.5Gy、15Gy和30Gy 的γ<WP=6>射线辐照均可抑制淋巴细胞增殖能力,其中7.5Gy辐照已经基本消除了淋巴细胞增殖能力,其效应相当于30Gy辐照效应的近90%;γ射线辐照可以诱导淋巴细胞凋亡,7.5Gy辐照后淋巴细胞进入凋亡和进入凋亡晚期坏死的细胞比例均明显少于15Gy和30Gy。[结论](1)7.5Gy或以上的γ射线辐照可以有效地抑制小鼠淋巴细胞增殖能力,提示7.5Gy辐照可以有效去除淋巴细胞引起严重GVHD的危险;(2)非清髓的预处理方案,可以实现异基因移植物植活,一定剂量γ射线辐照后的淋巴细胞,具有促进NMT移植物植活的作用,不会引起GVHD;(3)临床NMT实践提示:供者淋巴细胞对于NMT成功有积极作用;(4)和15Gy、30Gy辐照比较,7.5Gy辐照基本去除了淋巴细胞引起GVHD的危险,但是从淋巴细胞凋亡的角度看可能更加有利于保留淋巴细胞包括促进移植物植活在内的部分免疫功能。
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