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一.同种带瓣主动脉管道的制备和保存 目的:建立长期有效的有活性的人类同种带瓣管道的制备及保存方法,将上述方法保存的同种瓣应用于临床于术和基础研究工作。 方法:无菌条件下取健康成年(<40岁)、男性、脑死亡6小时以内心脏,修剪成同种带瓣主动脉管道,在37℃灭菌12小时,程控降温至-60℃,取出后放入液氮罐中保存。应用光镜、电镜、流式细胞仪比较新鲜和程控降温液氮保存后的同种带瓣管道在组织结构、超微结构、细胞活性之间的差异。 结果:程控降温后液氮保存的同种带瓣管道与新鲜材料在组织结构、超微结构及细胞活性等方面无明显区别。 结论:无菌条件下制备的同种带瓣管道经程控降温、液氮保存后结构完整,具有良好的细胞活性,可作为异体材料应用于临床手术。 二.液氮保存3至92月人同种带瓣主动脉细胞活性的实验研究 目的:研究液氮保存时间对人类同种主动脉瓣叶和主动脉管壁内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞活性的影响,探讨液氮保存的同种瓣的有效使用期限,指导临床应用。