微流控芯片用于中药中血根碱和白屈菜红碱分离和提取的研究

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微流控芯片(Microfluidic chip)是近年来发展起来的新型分析技术,具有操作简便,分析快速,分离高效,样品及试剂消耗少,易于微型化、集成化、自动化等特点,在药物分析、生命科学、环境检测及食品安全等领域均显示出了重要的作用。微流控分析系统的核心分析技术是基于毛细管电泳分离、液-液萃取、无膜扩散,等。多相层流分离的微流控系统作为其中的一种分析手段,具有简单的结构及许多其他独立的功能,应用前景极其广阔。当今,对应用于医药领域的分析系统的要求一再提升,微流控领域的出现给高效、快速、低耗能的药物分析带来了新的希望。本工作主要是微流控芯片毛细管电泳在药物分析中的应用研究。分别对中药材中的白屈菜红碱和血根碱的萃取及分离检测进行了研究,希望可以将萃取和分离相结合从而形成分析中药的有效方法。第一章介绍了微流控芯片的发展历程,重点对其在药物前处理中的应用及药物检测分析(体内药物分析、化学药和中药及其制剂分析、手性药物分析及其它药物研究领域)中的应用进展进行了综述。第二章采用微流控芯片毛细管电泳分离激光诱导荧光检测法检测了白屈菜中血根碱。利用碱性条件下血根碱具有自然荧光,且SDS可使其荧光增敏的性质,以pH=9.0的20mmol/L硼砂-SDS为电泳缓冲溶液,以荧光素钠为内标物,在微流控芯片上检测白屈菜中的血根碱。分别考察了溶液pH值、加入SDS浓度、分离电压对检测的影响。80s内可完成血根碱和荧光素钠的分离,在此条件下白屈菜红碱不产生干扰。此方法灵敏、快速、准确,可用于检测白屈菜中的血根碱。第三章采用微流控芯片非水毛细管电泳法分离和检测了博罗回中的白屈菜红碱和血根碱。考察了玻璃材质的微流控芯片毛细管电泳中有机溶剂类型、缓冲溶液pH值、以及芯片通道表面经二氯二甲基硅烷涂层对白屈菜红碱和血根碱的分离效果的影响。以乙酸铵-乙酸-甲酰胺-水比例为2:0.5:5:2.5(pH=5.55)缓冲溶液作为电泳缓冲液,可在150s内可完成白屈菜红碱和血根碱的进样和分离。以二氯二甲基硅烷涂层通道表面,可进一步改善分离。该法可用于分离及定量药材中的白屈菜红碱和血根碱,并为分离结构相似的组分提供了方法借鉴。第四章研究了用微流控芯片提取白屈菜中白屈菜红碱和血根碱的方法。用直流注射泵控制液体的流速,使其在微流控芯片通道中形成液-液两相层流,通过在两相界面上两种液体之间的分子扩散效应,借助于白屈菜红碱和血根碱在有机相和水相液体中的溶解性的差别而将其萃取至有机相中,实现了对白屈菜药材中白屈菜红碱和血根碱的提取。第五章研究了一种以高效液相色谱法对白屈菜药材中的血根碱和白屈菜红碱的分离和含量测定的方法。色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-1%三乙胺溶液(磷酸调pH值至3.0)(26:74)为流动相;检测波长为269nm;流速1.0mL/min;柱温35℃;结果表明,该检测条件下,20min内可完成一次检测和分离的过程,对白屈菜药材中的血根碱和白屈菜红碱的分离和检测等质量控制相关过程具有一定的意义。实验结果表明,在微流控芯片上进行的中药材成分的萃取、纯化及检测,简单便利、试剂消耗量低、灵敏度高、分析耗时短,精密度、回收率均可达到药物分析的要求。与HPLC、GC等精密仪器相比,商品化的微流控芯片分析仪价格低廉,玻璃芯片的制作简单且成本低,因此,微流控芯片分析具有成本低、易于推广的优势,使其在药物分析中的应用将日益广泛。
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