TRAP1在HCC细胞株中的表达及其影响因素

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目的:通过对比hepG2和稳定转染HBV的hepG2(hepG2.2.15)细胞、不同侵袭程度的HCC细胞株(低侵袭性hep3B2.1-7、中侵袭性hepG2细胞株和高侵袭性sk-hep1细胞株)以及它们在雷帕霉素诱导的不同自噬水平下TRAP1,Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平,探讨三种不同因素对细胞的自噬水平和TRAP1表达的影响以及相互关系;通过雷帕霉素诱导hepG2细胞自噬后,测细胞生长曲线,探讨不同自噬水平对细胞生长的影响。  方法:使用Western Blotting,protein simple及QRT-PCR方法检测TRAP1及自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在蛋白质和mRNA表达水平的表达情况,并使用MDC荧光染色法观察细胞的自噬水平。使用细胞计数板在显微镜下连续5天计数细胞数,作细胞生长曲线。  结果:在不同侵袭性的肝癌细胞株,hepG2中TRAP1表达水平和细胞自噬水平均最高,hep3B2.1-7中较高,而sk-hep1中最低;细胞自噬水平以及TRAP1的表达水平在转染HBV的hepG2(hepG2.2.15)中明显低于未转染HBV的hepG2;随着雷帕霉素浓度增加,细胞自噬水平增加,10μmol/L时最高,hepG2、hep3B2.1-7和sk-hep1中TRAP1的表达水平变化趋势与之相同,但在hepG2.2.15中,随着自噬水平增加,TRAP1的表达水平反而降低。在hepG2中,随着雷帕霉素浓度增加,细胞生长速度增加,10μmol/L时最快,15μmol/L时反而减慢。  结论:不同侵袭性的HCC细胞株,细胞自噬水平及TRAP1的表达水平均不同;HBV抑制细胞自噬以及TRAP1的表达;雷帕霉素诱导的细胞自噬促进TRAP1的表达,而HBV抑制雷帕霉素诱导的细胞自噬对TRAP1表达的促进作用;适当范围内增加细胞自噬水平可以促进细胞生长,而自噬水平过高反而抑制细胞生长。
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