目的 研制布氏菌病新型疫苗,为安全、有效的防治布氏菌病提供保证。方法 采用基因重组技术扩增牛、羊、猪布氏菌保护性抗原BCSP₃₁、BCSP₃₉和L₇/L₁₂基因片段,及BCSP₃₁-L₇/L₁₂和BCSP₃₉-L₇/L₁₂融合基因片段,克隆于原核表达载体pQE₃₀上,在IPTG作用下诱导重组蛋白的表达,用层析拄纯化BCSP₃₁、BCSP₃₉和L₇/L₁₂及BCSP₃₁-L₇/L₁₂和BCSP₃₉-L₇/L₁₂重组蛋白抗原;扩增布氏菌保护性抗原BCSP₃₁、BCSP₃₉和L₇/L₁₂基因片段,及BCSP₃₁-L₇/L₁₂和BCSP₃₉-L₇/L₁₂抗原融合基因片段,克隆于真核表达载体pcDNA₃上,转染Hela细胞,在G₄₁₈的作用于下诱导外原蛋白的表达,经狭缝杂交证实BCSP₃₁、BCSP₃₉、L₇/L₁₂和BCSP₃₁-L₇/L₁₂、BCSP₃₉-L₇/L₁₂蛋白抗原的表达;制备布氏菌病BCSP₃₁/pcDNA₃、BCSP₃₉/pcDNA₃和L₇/L₁₂/pcDNA₃和BCSP₃₁-L₇/L₁₂/pcDNA₃、BCSP₃₉-L₇/L₁₂/pcDNA₃单价、双价基因疫苗,及BCSP₃₁、BCSP₃₉、L₇/L₁₂和BCSP₃₁-L₇/L₁₂、BCSP₃₉-L₇/L₁₂单价、双价基因重组蛋白疫苗,免疫Balb/c鼠三次,再用牛、羊和猪布氏菌毒株攻击观察免疫应答和免疫保护效果。结果 构建的重组质粒测序结果与设计的序列完全一致;获得了在原核细胞和真核细胞中表达的BCSP₃₁、BCSP₃₉、L₇/L₁₂和BCSP₃₁-L₇/L₁₂、BCSP₃₉-L₇/L₁₂重组蛋白,及具有免疫学活性的BCSP₃₁、BCSP₃₉、L₇/L₁₂和BCSP₃₁-L₇/L₁₂、BCSP₃₉-L₁₂。纯化重组蛋白抗原;布氏菌病新型基因疫苗免疫Balb/c鼠,产生了有效的特异性抗体和细胞免疫应答的效果。结论 研制的布氏菌病新型疫苗初步证实具有良好细胞免疫和体液免疫的免疫应答的效果,深入研究正在进行之中,有望为布氏菌病的有效防治提供保证。