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目的:研究高迁移率核小体结合蛋白1(High-mobility group nucleosome binding protein 1,HMGN1)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在糖尿病肾脏疾病(Diabetic kiney disease,DKD)小鼠肾组织中的表达情况,探讨HMGN1/TLR4与肾功能、肾脏病理之间的关系,为HMGN1/TLR4通路在DKD免疫治疗中的运用提供理论依据。方法:体内实验:1.动物模型及分组:(1)1型糖尿病肾病(Type 1 diabetic nephropathy,T1DN):C57BL/6雄性小鼠15只,随机分成3组:对照组(NC组);模型组[T1DN组,单次腹腔注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)150mg/kg];胰岛素干预组(T1DN+INS组,小鼠成模6周后,胰岛素1U/d腹腔注射8周)。药物干预结束后收集各组小鼠的血、尿、肾组织样本。(2)2型糖尿病肾病(Type 2 diabetic nephropathy,T2DN):选取C57BLKS/J小鼠20只,设为野生型组(WT组);C57BLKS/J-db/db小鼠40只,随机选取20只设为模型组(T2DN组),其余设为胰岛素干预组(T2DN+INS组,胰岛素1-2U/d)。各组分别于6周龄、8周龄、12周龄、16周龄时收集小鼠的血、尿、肾组织样本。2.常规生化检测:包括血糖、肾脏指数、尿白蛋白尿肌酐比(Urea albumin creatinine ratio,UACR)等。3.肾脏病理学改变:苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色和高碘酸希夫氏(Periodic acid-Schiff,PAS)染色,观察肾组织结构变化并计算系膜指数。4.肾组织中HMGN1、TLR4 mRNA和蛋白的表达水平:分别采用原位杂交(In-situ hybridization,ISH)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色检测,并与各参数间作相关性分析。体外实验:1.分组:肾小管上皮细胞系(NRK-52E,ATCC~?CRL-1571?)分为两组:对照组(Control组,5mmol/L葡萄糖中培养);高糖组(HG组,25mmol/L葡萄糖中培养)。2.细胞中HMGN1、TLR4 mRNA和蛋白的表达水平:相应处理72小时后,分别采用ISH和western blot检测。结果:体内实验:1.与NC组相比,T1DN组的血糖值、肾脏指数、UACR、系膜指数明显升高[(8.57±0.70)vs(24.28±1.94)mmol/L,(1.44±0.02)vs(1.70±0.09)mg/g,(97.69±10.68)vs(697.67±168.78)μg/mg,P<0.05],同时肾小球系膜扩增,肾小管不同程度损伤,间质区炎性细胞浸润;肾组织中HMGN1和TLR4表达均增加(P<0.05);HMGN1、TLR4之间的表达变化呈正相关(r=0.3373,05322,P<0.05),且两者分别与系膜指数呈正相关(r=0.3687,0.3657,0.5736,0.8257,0.3591,0.31751,P<0.05);T1DN+INS组中上述指标无明显变化(P>0.05)。2.T2DN组生化和病理学指标均提示糖尿病肾病表现;6周龄时肾组织HMGN1表达较WT组增高,8周龄时降低(P<0.05);各周龄肾组织TLR4的表达始终高于WT组(P<0.05);另外,8周龄时HMGN1的表达变化与TLR4、UACR、肾小球系膜指数呈负相关(r=﹣0.450,﹣0.515,﹣0.622,-0.295,P<0.05)。体外实验:与Control组相比,HG组细胞中HMGN1表达降低,TLR4表达增高(P<0.05)。结论:1.T1DN小鼠肾组织中的HMGN1/TLR4表达上调并可能参与介导肾病进展,而T2DN早期小鼠肾组织和高糖诱导的NRK细胞中HMGN1表达降低,TLR4表达增高。2.HMGN1在T1DN和T2DN的病理机制中可能发挥不同的作用。3.高血糖可能是介导T2DN时HMGN1表达下调的重要因素之一,而T1DN时HMGN1的表达变化可能主要与高血糖以外的其他因素有关。