【摘 要】
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本试验以兴凯湖梅花鹿肝脏组织为研究材料，用Trizol方法提取兴凯湖梅花鹿肝脏组织总RNA，反转录成单链cDNA，长距离PCR方法合成双链cDNA；PCR产物经蛋白酶K水解、纯化后，用SfiI酶切；将
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本试验以兴凯湖梅花鹿肝脏组织为研究材料，用Trizol方法提取兴凯湖梅花鹿肝脏组织总RNA，反转录成单链cDNA，长距离PCR方法合成双链cDNA；PCR产物经蛋白酶K水解、纯化后，用SfiI酶切；将酶切产物进行分级分离，回收400bp以上的cDNA组分，并与λTriplEx2载体连接；连接产物经体外蛋白包装，产生原始文库；鉴定文库的滴度和重组效率后，进行文库扩增。随机挑取96个噬菌斑，用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增，以检测所构建的cDNA文库的质量。经测定该文库初始滴度为7.9×10~5 pfu／ml，扩增后滴度为1.06×10~9 pfu／ml，重组率为88％。插入片段长度为0.3～3.0kb。同时，由于反转录过程中采用附加序列的方法使全长mRNA得到反转录，所以得到的cDNA是完整的，完全符合cDNA文库的要求。本试验成功构建了兴凯湖梅花鹿肝脏组织的cDNA文库。兴凯湖梅花鹿肝脏组织表达型λ噬菌体cDNA文库的成功构建，不仅保存了珍贵的梅花鹿基因资源，而且对于梅花鹿中有明确功能的特异基因的克隆、表达以及新基因的克隆与功能研究奠定了物质基础。
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