重楼总皂苷抗肿瘤机制研究

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重楼(Rhizoma Paridis)属百合科(liliaceae),又名蚤休,药用部分为重楼属植物的干燥根茎部,形状呈团块状圆柱形。现代药理研究表明,重楼具有止血消痛,消炎、控制肿瘤、调节免疫等功能。现已从该属植物中分离鉴定了50余种化合物,主要的有效成分为重楼总皂苷(Rhizoma Paridis total saponin, RPTS)。有关重楼抗癌研究,已有很多报道,如胃癌、乳腺癌、食道癌等,但对骨肉瘤的研究甚少。目前对RPTS抗肿瘤机制的研究还处于初期阶段,大多是就单一的某方面进行研究和阐述,虽然得出了一些重要的研究成果,但重楼抗肿瘤机制是一个综合相关联的过程。因此,本实验以移植骨肉瘤S180细胞的昆明系小白鼠为载体,研究滇重楼总皂苷抗肿瘤作用。通过RPTS对载体肿瘤的抑制作用和延长载体存活时间,说明RPTS抗肿瘤作用;用HE染色技术对重楼不同剂量组处理后的载体肿瘤组织进行染色,观察其抗肿瘤效应;运用免疫组化技术,分析不同重楼总皂苷剂量组对相关促癌基因、抑癌基因和癌变性因子表达的影响,阐述重楼总皂苷的抗癌机制。实验结果显示如下:1. RPTS对S180小鼠肿瘤有明显抑制作用,不同剂量(0.075g/kg、0.15g/kg、0.3g/kg)总皂苷小鼠灌胃,抑制肿瘤率分别为38%、41%及42%,CTX组(0.02g/kg)为56.5%,与对照组(灌胃蒸馏水)相比均具有显著性差异(P<0.01);RPTS能显著延长移植瘤小鼠存活时间(生命延长率),具有明显的量效关系,三种剂量的生命延长率分别为34%、44%和55%,存活天数与对照组有显著性差异(P<0.01)。2.组织学研究表明,CTX组和RPTS中、高剂量组能有效的减少移植瘤细胞的数目,与模型对照组相比有显著性差异(P<0.01),且各组移植瘤细胞结构都出现明显染色质边集化、降解和“出泡”等现象,随RPTS剂量升高此结构变化越明显。3.运用免疫组化实验对荷瘤S180小鼠癌细胞P53、VEGF、MDM2和NF-Kb/P65四个基因在不同处理条件(CTX组、RPTS低剂量组、RPTS中剂量组、RPTS高剂量组)下的阳性表达率进行测定和分析。结果显示,抑癌基因P53在五种不同处理条件下的阳性表达率,对照组最少,CTX组最大,RPTS低、中和高剂量组阳性表达率逐渐增大,且各组与模型对照组比较,除RPTS低剂量组没有显著性差异,CTX组、RPTS中、高剂量组均具有显著性差异(P<0.01);促癌基因MDM2阳性表达率在五种不同处理条件下,对照组表达量最大,CTX组最小,RPTS低、中和高剂量组随剂量加大表达量明显降低,与模型对照组比较,CTX组有极显著性差异(P<0.01),RPTS高剂量组有显著性差异(P<0.05),低、中剂量组没有显著性差异;VEGF阳性表达率在五种不同处理情况下,对照组最大,CTX组最小,RPTS低、中和高剂量组随剂量加大表达逐渐减小,与模型对照组比较,CTX组有极显著性差异(P<0.01),RPTS中、高剂量组均具有显著性差异(P<0.05、P<0.01),RPTS低剂量组没有显著性差异;核转录因子NF-Kb/P65,在五种不同的处理情况下,对照组中的阳性率表达最大,CTX组最小,RPTS低、中和高剂量组随着剂量的加大,阳性表达率也逐渐变小,与模型对照组比较,除RPTS低剂量组外,其他各组均表现出显著差异(P<0.01)。结论:RPTS对荷瘤S180小鼠肿瘤的生长具有显著地抑制作用,能显著延长移植瘤小鼠的存活时间;RPTS中、高剂量组能显著性地降低移植瘤细胞数目和促进凋亡结构的发生;RPTS通过下调VEGF、MDM2和NF-Kb/P65和上调P53基因的表达抑制肿瘤细胞的增殖和生长,并促进肿瘤细胞的凋亡。
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