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目的:观察沉默网腔钙结合蛋白(Calumenin)对心房肌细胞L-型钙通道及电流影响,探索calumenin在房颤发生、发展过程中起到的作用,为心房纤颤治疗药物研发提供新的方向。 方法:实验采用原代养殖的乳鼠心房肌细胞,随机分成对照组、calumenin沉默组。实验分为四个部分:1、分离乳鼠心房肌细胞并采用免疫组化技术鉴定分离的细胞为心房肌细胞;2、采用慢病毒转染技术沉默心房肌细胞中calumenin蛋白,通过免疫荧光技术检测质粒转染是否成功;3、采用免疫印迹(Western Blot)技术检测calumenin蛋白沉默效果及L-型钙通道蛋白表达情况;4、利用全细胞膜片钳技术检测两组心房肌细胞动作电位及L-型钙电流(ICa-L)变化。 结果:与对照组相比,沉默calumenin组检测到的ICa-L密度明显减小(-8.501±1.213 vs.-4.853±0.6086 pA/pF,p=0.0101),动作电位幅值APA(140.7±2.395 vs.129.1 ±2.557,p=0.0027)、动作电位时程(APD30,APD50,APD90 p值均<0.05)均缩短,L-型钙通道蛋白表达明显增加(0.5223±0.02496 vs. 1.301±0.01119, p<0.0001)。 结论: 沉默Calumenin可引起细胞内钙超载,导致L-钙电流减少,动作电位时程缩短,L型钙通道表达增加。