亲免蛋白（immunophilins）是指与免疫抑制剂FK506、环孢素A（cyclosporin A，CsA）和雷帕霉素相结合的蛋白质，主要包括FK506结合蛋白（FK506 binding protein，FKBP）、亲环素两大类，其中亲环素与CsA结合而FKBP与FK506、雷帕霉素结合。亲免蛋白具有高度保守性，广泛分布于各种生物中，大部分具有肽基-脯氨酰顺反异构酶（peptidylprolyl cis-trans isomerase，PPIase）活性。Fpr3是酿酒酵母FKBP家族的第三个成员，具有PPIase活性，能与分子伴侣结合从而加速多肽中脯氨酸残基的构象转化。Fpr3也通过PPIase结构域与蛋白磷酸酶1的相互作用参与维持重组检验点活性，此过程不依赖于PPIase的催化活性。 本论文将构建好的原核表达质粒pGEX-5X-1-Fpr3转化大肠杆菌并进行表达与纯化，以纯化的融合蛋白为抗原免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体并测定其效价。主要研究内容和结果如下： 一、GST-Fpr3的表达与纯化 将构建好的重组质粒pGEX-5X-1-Fpr3转化大肠杆菌进行诱导表达，同时进行最佳诱导时间和最佳IPTG诱导浓度的筛选实验，确定最优诱导时间为5h，最优IPTG浓度为0.4mmol/L。重组质粒用IPTG诱导表达后经GST亲和柱纯化，SDS-PAGE和Western blot分析显示表达相对分子量为90kDa的GST-Fpr3融合蛋白。纯化的重组蛋白用Factor Xa蛋白酶进行柱上酶切去除GST标签，SDS-PAGE检测表明获得了去除标签的Fpr3。 二、Fpr3蛋白多克隆抗体的制备与鉴定 用纯化后的重组蛋白GST-Fpr3作为抗原免疫日本大耳白兔，制备抗GST-Fpr3蛋白的多克隆抗体。对获得的免疫血清采用饱和硫酸铵沉淀法进行纯化，初步纯化的多克隆抗体经rProteinA亲和柱进一步纯化。将获得的抗体进行Western blot分析表明多克隆抗体能与重组蛋白发生很好的特异性结合。间接ELISA检测结果表明抗体效价为1：100000。