三碘甲状腺原氨酸及真菌毒素的化学发光免疫分析方法研究

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化学发光免疫分析(CLIA)方法结合了化学发光技术的高灵敏性及免疫分析技术高特异性,在生命科学和环境分析领域获得广泛的应用。本论文主要围绕三碘甲状腺原氨酸和真菌毒素的化学发光免疫分析方法的建立和优化开展了一些研究,对临床样品筛选和检测有一定的应用价值和学术意义。本文共分为五章,分述如下:第一章本章介绍了甲状腺激素的种类、来源和作用功能及真菌毒素的种类及其危害,在此基础上,对三碘甲状腺原氨酸及真菌毒素检测技术和方法进行了综述。此外,本章还概述了化学发光免疫分析的基本原理、方法和研究进展。第二章将兔抗T3抗体直接包被于96-孔聚苯乙烯微孔板上制得固相抗体,高灵敏度的HRP-luminol-H2O2化学发光体系作为信号示踪体系,建立了血清中三碘甲状腺原氨酸(Triiodothyronine, T3)高灵敏的化学发光免疫分析法(Chemiluminescent immunoassay,CLIA)。本分析体系通过加入蛋白阻断剂8-苯胺基-1-萘磺酸钠盐(ANS)实现了对人血清中T3的直接测定,而不需要对样品进行前处理。血清样品测定结果与商业试剂盒测定结果高度相关,证实本法具有重要的临床应用价值。第三章结合磁性微粒子分离技术和化学发光免疫分析技术,建立了磁性微粒子化学发光免疫分析法,实现血清样品中T3的检测。磁性微粒子表面包被羊抗兔T3抗体,可与溶液中兔抗T3抗体相结合,从而实现分离。以本章建立的磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人血清中的T3,其测定结果与板式化学发光检测法的结果相关性良好。与板式发光法比较,本法可提高检测的线性范围和灵敏度,节约抗体用量,且操作简便,易于实现自动化。第四章以辣根过氧化物酶(HRP)标记玉米赤霉烯酮(ZEN),建立一种直接竞争免疫分析法来检测谷物中ZEN。以磁性微粒子为分离固相,以HRP催化luminol-H2O2为化学发光体系。对建立的谷物中ZEN的CLIA方法进行了方法学评价,各项指标均达到定量分析的要求。将本章建立的方法用于40例谷物样品的分析,测值与国外ELISA试剂盒测值的相关性良好。第五章将鼠抗赭曲霉毒素A(Ochratoxin A, OTA)单克隆抗体包被于96-孔聚苯乙烯微孔板上制得固相抗体,以HRP标记OTA制成OTA-HRP偶合物,建立了直接竞争免疫分析法检测谷物中OTA含量。建立的该方法各项指标均达到定量分析标准,可用于实际样品分析。
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