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第一部分启动子区SNP对CD274分子在人胃癌中的表达调控研究目的:探讨人胃癌中CD274核心启动子区SNP(单核苷酸多态性)对CD274转录调控的影响。方法:首先通过调研明确CD274基因核心启动子区,并在胃癌组织与远端正常组织通过PCR法扩增出该片段,并对其进行分析;选择突变频率较高且位于转录因子区域的SNP;构建包含CD274基因核心启动子序列的SNP rs10815225突变型和野生型两种基因型荧光素酶重组表达载体;将重组载体与转录因子SP1共转染,并检测其荧光素酶活性,运用统计学软件分析SNP rs10815225基因型对CD274的调控作用影响;最后对CD274和SP1进行关联分析,研究胃癌中两者的关联性。结果:(1)CD274核心启动子区域位于转录起始点上游约300bp,该区域存在四个SNP位点,SNP rs10815225位于转录因子SP1的结合区域;(2)胃癌组织中CD274基因核心启动子区域SNP rs10815225突变率为18.8%;(3)成功构建含SNPrs10815225两种基因型的CD274核心启动子荧光素酶重组表达载体,基因测序验证正确;(4)双荧光素酶报告基因系统分析发现,SNP rs10815225突变型相对野生型与SP1亲和力较低(P<0.05);(5)胃癌中CD274基因型及表达水平和转录因子SP1尚未见显著关联。结论:胃癌组织中CD274的核心区域位于转录前约300bp,其中SNPrs10815225在胃癌的中突变率较高,SNP rs10815225突变型可削弱转录因子SP1与CD274基因启动子区结合的亲和力,而单一的SNP rs10815225突变尚不足以显著影响CD274分子的表达。第二部分CD80基因3’-UTR上的SNP对miRNA调控作用的影响目的:研究CD80基因3’-UTR上SNP rs1599795对miRNA调控作用的影响。方法:通过构建包含CD80基因3’-UTR上miR-132-3p,miR-212-3p和miR-361-5p作用靶点序列的SNP rs1599795T型和A型两种基因型荧光素酶表达载体;将构建好的载体分别与不同miRNA共转染,并检测其荧光素酶活性;最后运用统计学软件分析SNP rs1599795对miRNA的调控作用影响结果:(1)与对照组荧光素酶活性相比,miR-132-3p、miR-212-3p和miR-361-5p分别能显著抑制SNP rs1599795T型和A型重组荧光素酶的活性(P<0.01);(2)比较两种不同基因型的重组荧光素酶载体发现,A基因型受miR-361-5p的抑制(P=0.006),相反T基因型可受miR-132-3p和miR-212-3p的共同抑制(P=0.003,P=0.018),提示SNP rs1599795可能参与胃癌中CD80基因的下调。结论:CD80基因3’-UTR上的SNP rs1599795可以影响miR-132-3p,miR-212-3p和miR-361-5p与靶序列的结合,从而改变了miRNA的调控功能,这一机制可能参与胃癌中CD80基因的下调。