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本课题是基于前期工作基础,已经证实肉苁蓉具有拟雌激素活性,其中,肉苁蓉总苷是主要有效部位,并经优化得到肉苁蓉总苷,含量以毛蕊花糖苷计为62.5%。由于肝代谢是体内代谢的主要方式,所以本课题以肝代谢为研究模式,建立“固有成分-入血-肝脏-胆汁”的体内代谢图谱,推测肉苁蓉总苷经肝代谢的质变规律,阐明肉苁蓉总苷的体内代谢过程,进一步揭示肉苁蓉总苷在体内的药效物质基础及其作用过程。(1)采用UPLC/Q-TOF-MS技术,对肉苁蓉总苷的入血成分进行分析,对比课题组前期已标定出43个固有成分,共鉴定出78个化学成分,其中5种原型成分,分别是/β-谷甾醇、薯蓣皂苷元、丁香苷、crenatoside、Kankanoside E,73种代谢成分,分别是8-表马钱酸硫酸结合物、乙酰化丁香脂素-O-β-D-葡萄糖苷、甲氧基化8-表马钱酸、甲基化红景天苷、去羟基化巴尔蒂苷、Kankanoside L硫酸结合物、甲氧基化6-去氧梓醇、甲基化京尼平苷、甲氧基化丁香苷、半乳糖醇硫酸结合物、乙酰化丁香苷、6-去氧梓醇硫酸结合物、Kankanoside A硫酸结合物、甲氧基化京尼平苷酸、羟基化京尼平苷、乙酰化芒柄花苷、去羟基化肉苁蓉苷F、甲基化管花苷B、肉苁蓉苷G葡萄糖糖醛酸结合物等。它们的代谢途径主要是硫酸化、乙酰化、甲基化、羟基化、去甲基化、去羟基化、葡萄糖醛酸化。(2)肝代谢是体内代谢的主要方式,本实验以肝代谢为主要研究模式,研究经肝代谢之后的肝匀浆代谢图谱。共鉴定出78种化学成分,其中7种原型成分,分别是8-表马钱酸、去咖啡酰基毛蕊花糖苷、6-去氧梓醇、Kankanoside L、芥子醛葡萄糖苷、dehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucoside、松果菊苷,71 种代谢产物,分别是乙酰化β-谷甾醇、8-表马钱酸硫酸结合物、去甲基Kankanoside E、去羟基化红景天苷、甲基化红景天苷、甲氧基化Kankanoside A、乙酰化丁香苷、Kankanoside A硫酸结合物、甲基化β-谷甾醇、羟基化Kankanoside M、甲氧基化肉苁蓉苷G、乙酰化肉苁蓉苷G、羟基化肉苁蓉苷G、丁香苷硫酸结合物、羟基化芥子醛葡萄糖苷、芥子醛葡糖苷葡糖醛酸结合物等。它们的代谢途径主要是甲氧基化、硫酸化、乙酰化、甲基化、羟基化、去甲基化、去羟基化、葡萄糖醛酸化。(3)结合液质联用技术,对比课题组前期工作基础,在经肝代谢后胆汁的代谢图谱中,共鉴定出48个化学成分,其中2种原型成分,它们分别是肉苁蓉苷G、dehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucoside,46种代谢成分,它们分别是半乳糖醇硫酸结合物、乙酰化肉苁蓉苷G、羟基化8-表马钱酸、肉苁蓉苷G硫酸结合物、去甲基肉苁蓉苷E、羟基化crenatoside、半乳糖醇萄糖醛酸结合物、甲基化丁香苷、去甲基胡萝卜苷等。它们的代谢途径主要是甲氧基化、硫酸化、乙酰化、甲基化、羟基化、去甲基化、去羟基化、葡萄糖醛酸化。(4)本部分实验中,灌胃肉苁蓉总苷后,分别收集血清、肝匀浆和胆汁样品进行分析,采用UPLC/Q-TOF-MS技术,通过比较血清、肝匀浆和胆汁样品中所含成分,可知共有9个成分,分别是:肉苁蓉苷F硫酸结合物、羟基化β-谷甾醇、乙酰化肉苁蓉苷G、甲氧基化管花苷B、肉苁蓉苷G葡糖醛酸结合物、乙酰化玉叶金花苷酸、甲氧基化2’-乙酰毛蕊花糖苷、甲基化松柏苷、甲氧基化芥子醛葡萄糖苷。它们的主要代谢途径是硫酸化、葡萄糖醛酸化、羟基化、乙酰化、甲氧基化。