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目的：将UMSCs与U87MG细胞体外共培养,模拟胶质瘤生长的微环境,研究探讨UMSCs与U87入恶性胶质母细胞瘤细胞系(U87Malignant glioma cells， U87MG)直接或间接共培养的方法及可能产生的结果,观察UMSCs对U87MG细胞形态、细胞周期及超微结构改变等的影响,分析UMSCs对U87MG细胞生物学行为的影响作用,总结UMSCs与U87MG细胞共培养方法与经验,为进一步研究提供方法和基础。方法：在无菌条件下将新鲜足月胎儿脐带采用组织块培养法及胰蛋白酶消化法分离,用含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的DMEM培养基,在5%CO2培养箱中进行培养,常规换液、传代等处理。取P4代UCMSCs采用流式细胞术对UMSCs表面标志CD2、 CD44、 HLA-ABC等进行鉴定。取P4代UCMSCs,将其浓度配制成lxl06/ml的混悬液,与lxl06/ml的U87MG连续稳定传代3代以上的单细胞悬液分别进行直接或间接共培养,分为直接共培养组、UCMSCs上清液原液间接共培养组、UMSCs上清液1：2间接共培养组、UMSCs上清液1：4间接共培养组及UCMSCs上清液1：8间接共培养组5组,并且设U87和UMSCs正常培养作为对照,用光镜分别观察各培养组U87MG细胞形态变化、用MTT法测定U87MG在共培养前后OD值变化并绘制生长曲线图,收集U87MG细胞进行流式细胞术生长周期测定及电镜超微结构观察。结果：(1) UMSCs流式细胞仪表面标志物鉴定用胰蛋白酶消化法分离、传代并在体外培养UMSCs，使UMSCs不断得到纯化,其P4代UMSCs的表面标志物CD29、 CD44、 HLA-ABC等阳性表达比率均在80%以上,其具有干细胞的典型特征。(2)四甲基偶氮唑盐法(multiply-table tournament， MTT)测定细胞活力结果MTT比色法结果显示UMSCs对U87MG有抑制作用,96小时培养后1：8、1：4、1：2及未稀释的UMSCs上清液对U87MG的抑制率分别为17%,24%,37.2%及46.4%,且具有时间、浓度依赖性,与对照组(U87MG细胞与DMEM正常培养组)两者之间比较有显著差异。(3) U87MG细胞在与UMSCs共培养后U87MG细胞形态学变化在正常应用DMEM培养48小时后在倒置相差显微镜下观察U87MG细胞呈贴壁生长,细胞清晰呈多角形,呈巢状生长；加入UMSCs上清液培养48小时后,细胞骨架消失,融合成片,部分细胞脱落,胞体收缩变形,随着培养时间的延长细胞形态由多角形变为梭形,突起消失,细胞间骨架结构断裂。(4) U87MG细胞在与UMSCs共培养后UMSCs细胞形态学变化UMSCs原代细胞贴壁生长,经2次DMEM换液培养后,培养瓶底部细胞伸展变形,成多角形或梭形,折光性好,细胞核较大。细胞经过继续换液培养2周左右单细胞层逐渐成巢状分布,将细胞消化传代继续培养12小时,细胞逐渐由圆形变为梭形或多角形,切形态规则,折光性强；继续培养见细胞增殖明显加快,72-96小时即可长满瓶底的90%左右。将UMSCs与U87MG细胞共培养24h后,镜下可见UMSCs多数细胞骨架消失、突起消失,局部呈铺路石样增殖。(5) U87MG细胞在UMSCs上清液作用下细胞周期变化在UMSCs上清液终浓度为1/2和1/4时分别作用12h、24h和48h后,FCM测定细胞周期结果显示：用1/2UMSCs上清液培养U87MG细胞12h后出现亚二倍体峰(sub-G1),占细胞总数的0.43%；用UMSCs上清液原液培养U87MG细胞48h后,出现明显sub-G1，占细胞总数的16.97%。用1/2UMSCs上清液培养12h后即可使U87MG细胞出现S期阻滞,UMSCs明显地改变了U87MG细胞的周期,并出现了周期阻滞现象(主要为S期阻滞)。(6) U87MG细胞与UMSCs共培养后细胞凋亡情况进一步用流式细胞仪对共培养后U87MG细胞凋亡情况进行测定,随着共培养时间的延长及UMSCs上清液浓度的增加,U87MG细胞凋亡率呈明显上升趋势,表现为时间及浓度显著差异性(P<0.01)。结论：通过对共培养前后U87MG与UMSCs共培养后形态学变化、生长曲线变化及对生长周期的影响作用的观察分析,得出UMSCs及其上清液对U87MG有抑制作用,而且呈时间及浓度依赖性。(1) UMSCs能显著降低U87MG细胞之间的粘附作用；(2) UMSCs能显著抑制U87MG细胞的增殖；(3) UMSCs与U87MG细胞共培养后U87MG细胞凋亡率随时间及UMSCs上清液浓度升高而升高(4) UMSCs与U87MG细胞共培养后U87MG细胞核固缩、碎裂,线粒体等细胞器呈空泡样变等凋亡改变。