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目的:构建具有感染性的人特异性肿瘤CD30基因与2型腺相关病毒载体,为探讨r AAV2/EGFP-CD30病毒载体免疫靶向治疗CD30阳性淋巴瘤动物模型做好准备。 方法:TRIZOL法从Karpas299细胞中提取总RNA,RT-PCR法获取CD30目的基因,将CD30目的基因与 p SNAV2.0质粒连接,构建p SNAV2.0/EGFP-CD30质粒;运用p ADhelper,pR2C2,p SNAV2.0-CD30三质粒共转染法转染293T细胞,72小时后氯仿滴度离心法收集与纯化r AAV2/EGFP-CD30病毒。PCR法鉴定r AAV2/EGFP-CD30重组病毒后,体外转染L540细胞,荧光定量PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)方法检测L540细胞CD30 m RNA、 s CD30变化。 结果:重组p SNAV2.0/EGFP-CD30质粒经酶切、测序验证后构建正确;三质粒共转染法可成功构建腺相关病毒载体r AAV2/EGFP-CD30,病毒滴度为3×10^12 v.g/ml,重组后的r AAV2/EGFP-CD30病毒转染L540细胞后,可使CD30的mRNA水平下降、s CD30水平升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。 结论:本实验成功构建了r AAV2/EGFP-CD30病毒载体,为下一步研究CD30阳性肿瘤的基因免疫靶向治疗提供了基因传递的载体。